拟盘多毛孢属(Pestalotiopsis)真菌系统学研究及条形码基因的评价

摘要

类拟盘多毛孢真菌（Pestalotiopsis-like fungi），包括拟盘多毛孢属（Pestalotiopsis）、新拟盘多毛孢属（Neopestalotiopsis）和假拟盘多毛孢属（Pseudopestalotiopsis），是黑盘孢科（Amphisphaeriaceae）中的无性形真菌，其分生孢子具附属丝。该真菌类群在世界范围内广泛分布，在热带和亚热带生态系统中生物多样性尤其丰富，其宿主专一性不高，能够引起多种植物的多种病害，是重要的植物病原菌。作为内生真菌的重要类群，类拟盘多毛孢真菌能够产生多种具有生物活性的次级代谢产物，因此对该类真菌的研究具有重要的生态和经济价值。
　　本研究自2010年至2013年，从我国5个省份（云南、贵州、海南、重庆、广西）及泰国部分地区的60余种植物上采集了200多份叶片标本，共分离到了92株类拟盘多毛孢菌株，包括拟盘多毛孢属菌株40株、新拟盘多毛孢属菌株46株、假拟盘多毛孢属菌株6株。经过ITS，β-tubulin和tef1三个基因加合的系统学分析，并结合形态学研究，共鉴定出新种18个（5个已发表，13个待发表）和已报道种19个。这些充分说明类拟盘多毛孢真菌的植物来源比较广泛，在南方地区多种植物上分布较广，且具有丰富的物种多样性。18个新种分别为鱼尾葵新拟盘多毛孢（Neopestalotiopsi s caryotae），香樟新拟盘多毛孢（N.cinnamomumae），咖啡新拟盘多毛孢（N.coffeae-arabicae），N.podocarpusis，罗汉松新拟盘多毛孢（N.podocarpus-mac rophyllu s），N.pseudoau stralis，N.pseudosap rophyta，鹤望兰新拟盘多毛孢（N.strelitziae），Pestalotiopsis camellia-sinensis，饭甑青冈拟盘多毛孢（P.cyclobalanopsis），巴西木拟盘多毛孢（P.dracaenea），P.keteleeria，荔波拟盘多毛孢（P.libosis），李拟盘多毛孢（P.prunui），桃金娘拟盘多毛孢（P.rhodomyrtus），娑罗树拟盘多毛孢（P.shorea），P.subshorea，Pseudopestalotiopsis simitheae；19个已报道种为卵圆新拟盘多毛孢（Neopestalotiopsis ellipsospora），N.foedans，N.formicarum，藜芦新拟盘多毛孢（N.leucothoes），山龙眼新拟盘多毛孢（N.protearum），N.samarangensis，Pestalotiopsis adusta，P.anacardiacearum，P.camelliae，P.chamaeropis，P.colombiensis，P.diploclisiae，P.humus，P.kenyana，P.malayana，P.portugalica，P.rhododendri，Pseudopestalotiopsis cocos，Ps.theae。
　　利用PAUP软件的最大简约（Maximum Parsimony）算法，分别以拟盘多毛孢属（Pestalotiopsis）菌株的ITS，β-tubulin和tef1基因序列构建了单基因系统进化树，通过分析各个基因标签对该属真菌分类的种区分度和可信度（自举支持率），并结合各自的PCR扩增率，分别对三个基因标签做出评价，tef1基因标签以其较高的种区分能力和可信度被认为更适合用作拟盘多毛孢属真菌分类的DNA条形码标签。
　　本研究所有新种的模式标本及模式菌株均保存在贵州大学植物病理实验室（HGUP）和泰国皇太后大学（MFLUCC）。

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第一部分 综述

1. 类拟盘多毛孢真菌分类学

1.1 属间分类

1.2 属内分类

2. DNA条形码技术

2.1 DNA条形码技术的发展

2.2 类拟盘多毛孢真菌的条形码标签研究

3. 类拟盘多毛孢真菌分类趋势

4. 类拟盘多毛孢真菌的经济重要性

4.1 重要植物病原菌

4.2 开发新药物

5. 本课题的研究内容及意义

5.1 研究内容

5.2 研究意义

第二部分 研究内容

1. 材料与方法

1.1菌株来源

1.2 仪器与试剂

2.形态学研究方法

2.1 培养基的制作

2.2 标本处理和分离纯化

2.3 菌种保存

2.4描述鉴定

3.分子系统学研究方法

3.1 DNA的提取

3.2 PCR引物和反应体系

3.3 PCR产物检测和测序

3.4 分子数据处理

4.结果与分析

4.1分子系统学分析

4.2本研究分离的菌株的鉴定和描述

第三部分 总结与讨论

1.总结

1.1 类拟盘多毛孢真菌（Pestalotiopsis-like fungi）的多样性

1.2 拟盘多毛孢属（Pestalotiopsis）真菌 DNA条形码分子标签评价

2. 讨论

2.1 本研究对分子系统学的意义

2.2 类拟盘多毛孢真菌分类研究中存在的问题

2.3 类拟盘多毛孢真菌分类研究新思考

2.4 类拟盘多毛孢真菌分类学发展前景

参考文献

致谢

附录