贵州黑山羊瘤胃溶纤维丁酸弧菌分离鉴定

摘要

目的：共轭亚油酸（Conjugated Linoleic Acid，CLA）对人体健康有诸多益处，大量研究表明天然CLA主要来源于反刍动物产品，而反刍动物瘤胃溶纤维丁酸弧菌是合成CLA的主要菌株。因此，通过开展贵州黑山羊瘤胃中溶纤维丁酸弧菌的分离鉴定等试验研究，为后续进一步在菌株细胞水平深入研究和系统阐明CLA生物合成机制，以及开发利用贵州黑山羊瘤胃溶纤维丁酸弧菌奠定基础。
　　方法：以贵州黑山羊为试验动物，通过安装瘤胃瘘管，活体采集瘤胃液，采用现代分子生物学等实验手段开展贵州黑山羊瘤胃溶纤维丁酸弧菌分离与鉴定等相关研究。
　　结果：（1）给6只贵州黑山羊成功安装了改良瘤胃瘘管；（2）经过革兰氏染色、形态观察、16S rRNA序列分析和系统发育树构建后，1株菌鉴定为溶纤维丁酸弧菌，其16S rRNA GenBank登录号为X8997.1；革兰氏染色阴性，菌体呈弯曲杆状，有锥形端，菌落颜色为乳白色，菌落形状为圆形，半透明的粘稠菌落；在30℃~37℃和pH7.0环境下生长良好，硝酸盐不还原、产硫化氢阴性、触媒反应阴性但具有运动性等生理生化特征；（3）活体瘤胃灌注亚油酸（Linoleic Acid，LA）能促进贵州黑山羊瘤胃溶纤维丁酸弧菌增殖，增加瘤胃共轭亚油酸（c9t11-CLA and t10c12-CLA）和反-11-油酸（t11-C18∶1，简称TVA）含量，提高亚油酸异构酶浓度。
　　结论：瘤胃溶纤维丁酸弧菌常与其他厌氧菌处于伴生状态，极难分离纯化；连续3天灌注30mL食品级LA后，能促进贵州黑山羊瘤胃内CLA、TVA、亚油酸异构酶浓度和溶纤维丁酸弧菌数量不同程度的增加。