青蒿内生真菌抗植物病原菌的研究

摘要

植物内生真菌是巨大的微生物资源，在工农业生产与医药卫生方面方面有重大意义，抗菌内生真菌已成为人们研究的热点，能够产生许多新的活性物质，不但可以用于医药新药研发，还能用于农业植物病害防治。中药青蒿作为传统中药，广泛用于治疗多种疾病，其内生真菌具有抗菌、抗肿瘤、抗氧化等活性。
　　本研究以34株青蒿内生真菌为实验材料，分别与猕猴桃褐腐病菌Botryosphaeria dothidea B12、猕猴桃炭疽病菌Collectotrichum sp. B6、猕猴桃褐腐病菌Monilinia laxa LHF、猕猴桃软腐病菌phoma sp. HGHM、猕猴桃褐斑病菌Alternaria alternate RSF五种常见的猕猴桃病原真菌做平板对峙实验。结果发现菌株 WC-QHY-02-03具有较好的抑菌活性，抗菌谱最广，对猕猴桃软腐病菌HGHM的抑制效果最好，抑制率高达81.16％，对其他几种猕猴桃病原真菌的抑制率也均在50%以上。
　　对菌株 WC-QHY-02-03的生物学特性进行研究，结果显示该菌株生长的适宜温度为24-32℃，最适 pH为6.0，最佳碳源为葡萄糖，最佳氮源为酵母粉。结合形态学与分子系统发育的方法，确定该菌株为哈茨木霉 Trichoderma harzianum。
　　发酵条件优化实验显示，最佳的培养条件为：蔗糖30.0 g/L、NaNO312.0 g/L、MgSO41.5 g/L、K2HPO43.0 g/L。接种量为4%、培养基初始pH值7.0，120 r/min摇床发酵12 d。优化后发酵液对三种猕猴桃病原真菌均有抑制效果，发酵液浓度为100%时对猕猴桃褐腐病菌B12、猕猴桃炭疽病菌B6、猕猴桃褐斑病菌RSF三种病害菌的抑制率分别达到了80.26%、79.12%、45.84%。
　　该菌株发酵液乙酸乙酯粗提物对猕猴桃炭疽病菌B6、猕猴桃褐腐病菌B12、猕猴桃软腐病菌HGHM和猕猴桃褐斑病菌RSF四种猕猴桃病害真菌均有较好的抑菌活性。对该粗提物进行硅胶柱层析和薄层层析的方法进行分离纯化，得到较纯的组分 A；采用菌丝生长速率法对组分 A进行抑菌活性实验。镜检结果显示组分A作用后的猕猴桃软腐病菌HGHM的菌丝断裂，原生质外渗形成空腔而使菌丝生长受到抑制；且计算出其对猕猴桃软腐病菌HGHM的EC50为63.95μg/mL。

目录

第一章 前言

1.1青蒿的研究进展

1.2植物内生菌的研究进展

1.3微生物与生物防治

1.4立题依据及意义

1.5研究内容

第二章材料与方法

2.1 材料与方法

2.2 方法

第三章结果与分析

3.1青蒿内生真菌抗菌活性菌株筛选

3.2 菌株形态学鉴定

3.3分子系统发育分析

3.4 拮抗菌株WC-QHY-02-03生物学特性测定

3.5 菌株WC-QHY-02-03发酵培养基成分的初步优化

3.6 发酵培养条件的优化

3.7菌株WC-QHY-02-03发酵液抗植物病原真菌活性的研究

3.8 发酵液粗提物抑菌活性的研究

3.9 目标化合物的分离纯化

3.10 抑菌活性实验

第4章 结论与讨论

4.1结论

4.2讨论与展望

参考文献

附录I

附录II

致谢

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