黄芪、水蛭及中药复方影响大鼠肾MsC增殖及CTGF表达的比较研究

摘要

目的:通过对大鼠原代系膜细胞的培养,掌握体外培养细胞的技术;通过观察黄芪、水蛭及中药复方(由黄芪、水蛭、大黄、川芎、党参组成)对大鼠肾MsC增殖及结缔组织生长因子(CTGF)表达水平影响的研究,探讨黄芪、水蛭、中药复方治疗增生性肾小球肾炎的部分机理,比较益气、化瘀药物以及中药复方的作用强度。
　　方法:将SPF级SD大鼠60只分为空白对照组、黄芪组、水蛭组、雷公藤多甙组、复方组共5组,分别给予生理盐水或各组相应的药物灌胃,于十天后采集血清。在细胞培养的基础上,利用脂多糖诱发大鼠肾小球系膜细胞增生模型,将血清加入脂多糖诱发的大鼠肾系膜细胞第三代细胞96孔培养板中,分为控制组、模型组、对照组、复方组、黄芪组、水蛭组、雷公藤多甙组。用MTT比色法检测细胞增殖情况,用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定各组结缔组织生长因子(CTGF)的表达。
　　结果:(1)加入LPS刺激的模型组细胞增生活跃,12和24小时OD值明显高于控制组(P<0.05或P<0.01),差异显著;①与对照组比较:复方组对系膜细胞增生的抑制作用最好(P<0.01),其次为雷公藤组(P<0.01),然后为水蛭组(P<0.01),最后为黄芪组(P<0.01)。四组药物对系膜系膜的增殖与对照组相比均具有及显著差异;②与雷公藤组比较:黄芪组和水蛭组抑制作用较雷公藤弱,但无显著性差异,复方组抑制作用较强,有显著性差异(P<0.01);③与黄芪组比较:水蛭的抑制作用较强但无显著性差异(P>0.05),复方组的抑制作用强,有显著性差异(P<0.05);④与水蛭组比较:复方组对系膜细胞增殖的抑制作用强,有显著性差异(P<0.01)。作用12h以复方组抑制MsC增生的作用最强,其次为雷公藤组﹑水蛭组﹑黄芪组,水蛭组对系膜细胞增生的抑制作用强于黄芪。作用24h各含药血清组相比较,①与对照组比较:复方组对系膜细胞增生的抑制作用最好(P<0.01),其次为雷公藤组(P<0.01),再次为水蛭组(P<0.01),黄芪组抑制作用较差,无显著性差异;②与雷公藤组比较:黄芪组和水蛭组的抑制作用较雷公藤弱,有极显著性差异(P<0.01);③复方组的抑制作用强,有显著性差异(P<0.05);③与黄芪组比较:水蛭组和复方组的抑制系膜细胞增生的作用好,有极显著性差异。④与水蛭组比较:复方组对系膜细胞增殖的抑制作用强,有显著性差异(P<0.01)。说明作用24h仍以复方组抑制MsC增生的作用最强,其次为雷公藤组,再次为水蛭组,水蛭对系膜细胞增生的抑制作用强于黄芪。作用48小时各组之间相比,除雷公藤组与复方组相比有差异(P<0.05),其它各组相比均无显著性差异,说明作用48h仍以复方组抑制MsC增生的作用最强,其余各组从均数比较,雷公藤组作用最强,其次是黄芪、水蛭。(2)正常培养的大鼠MsC加入LPS刺激后CTGF的含量明显升高,与控制组相比有极显著性差异(P<0.01)。作用48h各组含药血清相比较,①与对照组比较:黄芪组、水蛭组、雷公藤组、复方组均能明显降低MsC表达CTGF的表达,有显著性差异(P<0.05);②与雷公藤组比较:黄芪组降低MsC表达CTGF的作用稍弱于雷公藤组,两者比较无显著性差异,水蛭的作用较强但两者相比较无显著性差异(P>0.05),复方的作用强,两者相比较有极显著性差异(P<0.01)③三组中药相比从均数上比较:对CTGF表达的影响作用强度从强到弱依次是复方组、水蛭组、黄芪组。这也与各组药物对系膜细胞增殖的影响结果相符。
　　结论:中药复方、黄芪、水蛭、雷公藤多甙组具有抑制肾系膜细胞增殖、抑制肾系膜细胞表达结缔组织生长因子(CTGF)的作用,因此黄芪、水蛭、雷公藤多甙、中药复方是增生性肾小球肾炎的有效药物;在增生性肾小球肾炎治疗上活血化瘀应比健脾益气具有更重要的作用,健脾益气和活血化瘀相结合效果最显著。

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前言

技术路线

材料与方法

1 实验材料

2 实验方法

3 指标检测方法

4 数据的统计与处理

结果

1 大鼠肾系膜细胞的鉴定

2 中药复方、黄芪、水蛭对大鼠肾MsC增殖的影响

3 中药复方、黄芪、水蛭对大鼠肾MsC表达CTGF的影响

讨论

1中医理论基础

2西医理论基础

3导师翟文生教师对系膜增生性肾小球肾炎的认识

4本实验结果分析

2 中药复方、黄芪、水蛭对大鼠系膜细胞表达CTGF的影响

5 本实验检测指标的意义

结论

1 结论

2 问题与展望

参考文献

致谢

附录1 细胞培养照片

附录2 文献综述