柴胡皂苷与黄芩苷配伍抗人肝癌细胞 SMMC-7721和HepG2体外作用的实验研究

摘要

目的：探讨柴胡皂苷与黄芩苷配伍抗肝癌的协同作用及其机制。
　　方法：本研究主要通过体外抗肿瘤实验,将柴胡和黄芩的主要活性成分柴胡皂苷与黄芩苷配伍给药作用于人肝癌 SMMC-7721 和 HepG2 细胞,用 MTT 法测定二者单用及配伍对肝癌细胞增殖的影响；采用流式细胞仪 Propidium Iodide(PI)单标法检测对 SMMC-7721 和 HepG2细胞周期进程的影响；用流式细胞仪 Annexin V-FITC/PI 双标法检测 SMMC-7721和 HepG2细胞凋亡率；采用免疫组化法检测细胞 SMMC-7721 凋亡相关基因 bcl-2、caspase-3 和 cox-2 蛋白表达水平。
　　结果：体外细胞毒实验( MTT)中发现柴胡皂苷(100 ug/ml,200 ug/ml, 400ug/ml, 800ug/ml, 1600ug/ml)和黄芩苷(10ug/ml, 20ug/ml, 30ug/ml, 40ug/ml, 50ug/ml)配伍对SMMC-7721和HepG2细胞的增殖作用明显强于二者单独给药；流式细胞仪显示经药物处理48h后,与对照组及两药单用组相比, SMMC-7721和HepG2配伍组的细胞凋亡率明显增高；流式细胞仪检测细胞周期结果显示,与阴性对照组比较,柴胡皂苷作用于肝癌SMMC-7721和HepG2细胞48h后均能使G0/G1期细胞数量显著增加,黄芩苷作用于肝癌SMMC-7721和HepG2细胞48h后均能使G0/G1、G2/M期细胞数量显著减少, S期细胞所占比例显著增加,配伍组作用 48h后, SMMC-7721和HepG2细胞的G0/G1期和S期细胞数量均增加,与两药单用组比较均有显著性差异,说明两药配伍有协同抑制作用；免疫细胞化学染色发现肝癌SMMC-7721细胞凋亡相关基因bcl-2表达降低, cox-2、caspase-3表达升高,且配伍组作用明显强于柴胡皂苷组和黄芩苷组。
　　结论：柴胡和黄芩主要活性成分柴胡皂苷与黄芩苷对抑制肝癌SMMC-7721 和 HepG2细胞的增殖具有明显的配伍协同作用；柴胡皂苷和黄芩苷抗肝癌配伍协同的作用机制可能是通过调节抑凋亡基因、促凋亡基因的表达和调节细胞周期变化等途径来实现的。

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中文摘要

英文摘要

前言

材料和方法

1 材料

2 方法

3 统计学分析

结果

1 柴胡皂苷、黄芩苷及其配伍诱导 SMMC-7721细胞后形态学观察

2 MTT法检测结果

3 FCM检测柴胡皂苷、黄芩苷及其配伍对 SMMC-7721细胞凋亡的诱导作用

4 FCM检测柴胡皂苷、黄芩苷及其配伍对 HepG2细胞凋亡的诱导作用

5 FCM检测柴胡皂苷、黄芩苷及其配伍对 SMMC-7721细胞周期的影响

6 FCM检测柴胡皂苷、黄芩苷及其配伍对 HepG2细胞周期的影响

7免疫细胞化学法(SV法)检测柴胡皂苷、黄芩苷及其配伍对 SMMC-7721细胞Bcl-2、caspase-3和 cox-2表达的影响

讨论

1 中医对肝脏的认识

2 原发性肝癌的病因

3 柴胡皂苷和黄芩苷配伍对人肝癌细胞株 SMMC-7721 和 HepG2 增殖的抑制

4 柴胡皂苷和黄芩苷配伍对人肝癌细胞株 SMMC-7721 和 HepG2 凋亡的影响

结论

参考文献

致谢

附录１ 病理照片

附录 2 文献综述

附录 3 在校期间论文论著和科研情况