积雪草对TGF-β1诱导的体外培养的肾小管上皮细胞MMP-2、TIMP-2表达的实验研究

摘要

背景：肾小管间质纤维化(renal tubuleinterstitial fibrosis,TIF)是多种原因引起的肾脏疾病进展至终末期肾病(end-stage renal disease,ESRD)的共同途径和主要病理特征。目前认为,TIF 的主要特征是细胞外基质(extracelluar matirx,ECM)的合成增加而降解减少,导致 ECM 的大量积聚。在某些病理条件下,肾小管上皮细胞(renal tubuleinterstitial cells,RTECs)可丢失细胞表面标志物而表现为肌成纤维细胞(myofibroblast, MyoF)的表型,即发生肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化(tubular epithelial to mesenchymal transdifferentiation,TEMT)。研究表明,MyoF可合成大量ECM,导致ECM积聚。而MMP-2/TIMP-2系统在ECM降解过程中发挥着重要作用。
　　目的：本实验研究积雪草颗粒对 TGF-β1 诱导的体外培养的肾小管上皮细胞MMP-2、TIMP-2mRNA及蛋白表达的影响,研究积雪草防治TIF的可能机制,为临床上应用积雪草防治TIF提供理论依据。
　　方法：以福辛普利(蒙诺)为阳性对照,将体外培养的大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK52E)随机分为6组：①正常对照组；②TGF-β1诱导组；③TGF-β1+积雪草小剂量组；④TGF-β1+积雪草中剂量组；⑤TGF-β1+积雪草大剂量组；⑥TGF-β1+蒙诺组。培养48h后取出,应用实时荧光定量PCR(realtime fluorescence quantitative PCR,RTFQ PCR)技术和western-blot技术检测细胞MMP-2、TIMP-2的mRNA及蛋白表达。每组实验重复三次。
　　结果：①与正常对照组相比,TGF-β1诱导组细胞由铺路石样上皮细胞向梭形肌成纤维细胞转变,积雪草大剂量组细胞形态变化不明显,蒙诺组细胞形态变化与积雪草大剂量组相似。与正常对照组相比,TGF-β1 诱导组 MMP-2、TIMP-2 的mRNA表达明显升高(p<0.05)；积雪草大剂量组和蒙诺组细胞MMP-2、TIMP-2的mRNA与TGF-β1诱导组相比明显下降(p<0.05),蒙诺组细胞变化与积雪草大剂量组相似；②与正常对照组相比,TGF-β1诱导组MMP-2、TIMP-2的蛋白表达明显升高(p<0.05)；积雪草大剂量组和蒙诺组细胞 MMP-2、TIMP-2 的蛋白表达与TGF-β1诱导组相比明显下降(p<0.05),蒙诺组细胞变化与积雪草大剂量组相似。
　　结论：①积雪草对TGF-β1诱导的体外培养的肾小管上皮细胞MMP-2、TIMP-2的高表达有抑制作用；②积雪草大剂量组抑制 MMP-2、TIMP-2 表达的作用与蒙诺相似；③积雪草抗TIF的作用与其剂量呈正相关；④积雪草抗TIF作用可能通过抑制MMP-2、TIMP-2的高表达,调节MMP-2/TIMP-2的平衡而实现。

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中文摘要

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前言

材料与方法

1 实验材料

2 试验方法

结果

1 细胞形态学的变化

2 积雪草颗粒对TGF-β1诱导的NRK52E细胞MMP-2、TIMP-2表达的影响

讨论

1.现代医学对TIF的研究

2.ECM与MMPs/TIMPs系统

3.积雪草的现代药理研究

4.积雪草颗粒对TGF-β1诱导的体外培养的肾小管上皮细胞MMP-2、TIMP-2表达的影响

结论

致谢

参考文献

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