补肾解毒通络方预防性治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠的实验研究

摘要

目的： 观察补肾解毒通络方对 Wistar 大鼠 EAE 的临床表现、CNS病理学改变及发病过程白介素( IL)-1β和白介素( IL)-17 的影响，探讨其对 MS 的防治作用和作用机制，为探索多发性硬化症新的治疗途径提供有意义的基础实验依据。
　　方法：
　　( 1)EAE 模型建立：采用豚鼠脊髓匀浆法制作抗原，免疫诱导 Wistar大鼠建立急性 EAE 模型，观察大鼠临床体征，记录每日体重和神经功能评分。
　　( 2)实验动物分组及给药：设立补肾解毒通络方高、中、低剂量组预防性给药，同时设置激素组、空白组、EAE 组及中药空白组。
　　( 3)样本采集：采用眼眶后静脉丛采血法于免疫后第15天(发病高峰期)和21天(恢复期)采取静脉血，分离出血清备测；心脏灌流后取脑、脊髓置于4%多聚甲醛中固定，石蜡包埋、切片。
　　( 4)苏木素-伊红( HE)法染色观察脑、脊髓病理改变；ELISA 法测定血清内白介素-1β、白介素-17 含量。
　　结果：( 1)补肾解毒通络方高、中剂量组大鼠的发病率与 EAE 组相比明显减低(P<0.01) ，高剂量组与激素组发病率无明显差异；补肾解毒通络方高、低组大鼠的平均潜伏期较 EAE 组明显延长(P<0.01) ，与激素组无显著差异(P>0.05)；补肾解毒通络方高、中剂量组大鼠发病高峰期、发病缓解期的神经功能评分明显低于 EAE 组，两组与激素组相比无显著差异；补肾解毒通络方高剂、中剂量组大鼠发病高峰期、发病缓解期的体重明显高于 EAE 组、中药低剂量组，两组与激素相比无显著差异(P<0.05)。
　　( 2)发病高峰期补肾解毒通络方高、中、低剂量组大鼠 CNS 中炎性病灶数与 EAE 组相比显著减少(P<0.01) ，高剂量组与激素组相比无显著差异(P>0.05)，中、低剂量组显著多于激素组(P<0.01)；发病缓解期补肾解毒通络方高、中剂量组大鼠 CNS 中炎性病灶数与 EAE 组相比显著减少(P<0.01) ，高、中剂量组与激素组相比无显著差异(P>0.05)，低剂量组显著多于激素组(P<0.01)。
　　( 3)补肾解毒通络方高、中、低剂量组发病高峰期血清 IL-1β含量较 EAE 组显著降低(P<0.01)，与激素组相比中、低剂量组显著升高(P<0.01)，高剂量组与激素组无显著差异(P>0.05)，中药高剂量显著低于中、低剂量组(P<0.05)，中、低剂量组之间无显著差异(P>0.05)；补肾解毒通络方高、中剂量组发病缓解期血清 IL-1β含量较 EAE 组显著降低(P<0.01)，与激素组相比中、低剂量组显著升高(P<0.01)，高剂量组与激素组无显著差异(P>0.05) ，低剂量组显著高于高剂量组(P<0.01) ，中、高剂量组之间无显著差异(P>0.05)。
　　补肾解毒通络方高、中、低剂量组发病高峰期血清 IL-17 含量较 EAE组显著降低(P<0.01)，与激素组相比高、中、低剂量组显著升高(P<0.01)，中、低剂量组显著高于高剂量组(P<0.05)；补肾解毒通络方高、中剂量组发病缓解期血清 IL-17 含量较 EAE 组显著降低(P<0.01)，与激素组相比高、中、低剂量组显著升高(P<0.01)，低剂量组显著高于高剂量组(P<0.05) ，高、中剂量组无显著差异(P>0.05)。
　　结论：( 1)预防性给予补肾解毒通络方可以明显降低急性 EAE 大鼠的发病率、缓解临床症状、缩短病程。
　　( 2)补肾解毒通络方预防性治疗能减轻 EAE 大鼠中枢神经系统炎症，保护大鼠神经功能。
　　( 3)补肾解毒通络方防治 MS 作用的部分机制可能是通过下调大鼠血清中 IL-1β和 IL-17 的表达，达到抑制炎症反应和自身免疫反应的作用。
　　( 4)补肾解毒通络方高、中剂量疗效差异不明显，均不及泼尼松。

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前言

材料与方法

1 材料

2 方法

3 资料分析以及统计学处理

结果

1 各组大鼠的临床表现观察

2 各组大鼠 CNS 的病理结果观察

3 各组大鼠发病高峰期、发病缓解期血清 IL-1β、IL-17 含量

讨论

1 补肾解毒通络方的来源及临床意义

2 Wistar 大鼠 EAE 模型的特点

3 补肾解毒通络方对 EAE 大鼠的预防性治疗作用和机制探讨

4 本实验的不足之处及下一步设想

结论

致谢

参考文献

附录 1 病理图片

附录 2 文献综述