广西眼镜蛇毒神经毒素的分离纯化及其镇痛作用的研究

摘要

目的：从广西眼镜蛇粗毒中分离纯化神经毒素，对其理化性质、镇痛作用及神经毒素一转铁蛋白偶联物镇痛作用进行研究。 方法：用CMSephadexC-25离子交换、SephadexG-50凝胶过滤层析法分离纯化广西眼睛镜蛇的神经毒素(neurotoxin,NT)。采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法(PAGE)对分离纯化广西眼睛镜蛇的神经毒素纯度进行鉴定；以SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定其分子量。用硫酸铵盐析，离子交换柱层析分离纯化SD大鼠的转铁蛋白。采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对分离纯化的转铁蛋白纯度进行鉴定。分别应用2.亚氨氢氯化硫醇(2-iminothiolane)、异型双功能连接剂间马来酰亚胺苯甲酰-N-羟基琥珀酰亚胺(m-Maleimidoben-zoyl-N-hydoxysuccinimide ester,MBS)将大鼠转铁蛋白、神经毒素偶联，合成神经毒素一转铁蛋白偶联体。用Sephacryl S-200凝胶过滤层析法鉴定偶联体的纯度，用单向免疫免疫扩散法测定神偶联体中的神经毒素的量。用小鼠热板法与醋酸扭体法，观察神经毒素、神经毒素一转铁蛋白偶联体的镇痛作用。 结果：从广西眼镜蛇毒中分离出的NT为单一组分，分子量约为7862Da。在小鼠热板法实验中，神经毒素能使小鼠痛阈提高百分率53.4％，神经毒素．转铁蛋白偶联物能使痛阈提高百分率95.1％。小鼠扭体抑制率为57.6％．阿托品能拮抗神经毒素一转铁蛋白偶联物的镇痛作用(p<0.01)：甲基阿托品未能拮抗神经毒素一转铁蛋白偶联物的镇痛作用(p>0.05)。 结论：广西眼镜蛇毒经两次色谱柱后，NT被分离纯化。NT能以转铁蛋白作为的载体穿过血脑屏障，在中枢发挥作用，有较强镇痛作用。

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前言

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实验步骤与方法

结果

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结论

参考文献

综述：蛇毒神经毒素研究进展

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