NO和MMP-9在高肺血流量大鼠肺动脉高压中的变化以及卡托普利的干预作用

摘要

目的：建立大鼠腹主动脉一下腔静脉分流模型，模拟先天性心脏病左向右分流的高肺血流量病理状态，从形态学及分子水平探讨先心病肺动脉高压的发生机制，并研究血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)对肺血管重构及相关内皮活性因子的干预作用，为阐明ACEI防治肺动脉高压奠定实验基础。 方法：雄性SD大鼠60只，6～7周，180～220g，随机分为6周假手术组(n=6)、6周分流组(n=8)、6周手术分流+生理盐水对照组(6周对照组，n=8)、6周手术分流+卡托普利组(6周卡托普利组，n=8)、11周假手术组(n=6)、11周分流组(n=8)、11周手术分流+生理盐水对照组(11周对照组，n=8)和11周手术分流+卡托普利组(11周卡托普利组，n=8)，共8组。假手术组仅暴露腹主动脉和下腔静脉“假手术”。其余各组均行腹主动脉．下腔静脉分流手术，对照组给予生理盐水灌胃对照，卡托普利组给予卡托普利灌胃干预。分别于6周、11周，用右心导管法测定大鼠右心室压力(RVSP)，并检测右心室肥厚指数(RVHI)，HE染色观测肺血管显微结构的变化，然后计算血管壁肌层厚度占外径的百分比(WT％)。用酶联免疫吸附法测血浆一氧化氮(nitric oxide，NO)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)含量，用免疫组化法测定肺动脉中内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和MMP-9的表达。 结果：分流组大鼠RVSP、RVHI和WT％均明显高于假手术组，11周分流组大鼠RVSP较6周分流组进一步升高；6周卡托普利组RVSP和RV/LN+S较6周对照组有下降趋势，11周卡托普利组：RVSP和RV/LN+S明显低于11周对照组。卡托普利组大鼠中、小型肌型动脉WT％较对照组明显降低。光镜下，分流组较假手术组大鼠肺小动脉的中膜平滑肌明显增生肥大，管壁普遍增厚，管腔明显狭窄。而卡托普利组大鼠肺动脉管壁增厚程度及管腔狭窄程度均较对照组大鼠明显减轻。分流组大鼠血浆NO和肺动脉eNOS均明显低于假手术组。6周卡托普利组血浆NO较6周对照组有升高趋势，但差异无统计学意义，而11周卡托普利组血浆NO较11周对照组显著增高。卡托普利组肺动脉eNOS较对照组显著增高。各分流组大鼠血浆和肺动脉中的MMP-9均显著高于各自假手术组；并且11周分流组大鼠较6周分流组进一步升高。卡托普利组血浆和肺动脉中的MMP-9均较对照组明显降低。右心指数与PAP之间，血浆MMP-9与PAP之间，肺动脉内皮MMP-9与PAP之间，肺动脉内皮MMP-9与血浆MMP-9之间，以及肺动脉内皮eNOS与血浆NO之间均存在显著正相关性。血浆NO与PAP之间，肺动脉内皮eNOS与PAP之间，肺动脉内皮eNOS与MMP-9之间，以及血浆NO与MMP-9之间均存在显著负相关性。 结论： 1、腹主动脉-下腔静脉分流导致肺动脉高压大鼠模型肺动脉内皮细胞中eNOS表达和血浆NO含量减少，血浆和肺动脉内皮细胞中MMP-9表达增加，提示NO、MMP-9对肺动脉高压的形成发展中起重要作用，可能协同地参与肺血管的重构。 2、ACEI能抑制肺血管平滑肌的增生和肥厚，可减缓高肺血流量所致肺动脉高压和肺血管重构。 3、卡托普利可能对肺动脉高压和肺血管重构中的内皮相关活性因子NO和MMP-9起重要的调节作用。

目录

声明

摘要

前言

一.材料

1.实验动物:

2.主要实验仪器设备:

3.所需试剂:

二.方法

1.实验动物分组

2.左向右分流大鼠肺动脉高压模型的建立:

3.肺动脉高压的检测

4.标本的留取和制备及指标的检测

5.酶联免疫吸附检测（ELISA）法测定

6.免疫组织化学检测方法

7.统计结果的处理

三.结果

1.一般情况:

2.肺动脉压力的测定:

3.右心室肥厚的指标:

4.肺动脉显微形态学变化：

5.肺中小型肌型动脉壁肌层厚度占外径的百分比(WT％)：

6.酶联免疫吸附测定血浆NO和MMP-9浓度结果分析

7.免疫组化分析肺组织动脉中eNOS和MMP-9表达

8.NO和MMP-9在肺组织及血浆中的相关性分析：

四.讨论

1.肺动脉高压大鼠模型的建立

2.肺动脉高压大鼠模型成功与否的检测

3.eNOS/NO体系与肺动脉高压

4.MMP-9与肺动脉高压

5.卡托普利对肺动脉高压和NO、MMP-9的干预作用

五.结论

参考文献

附图

文献综述：血管内皮细胞在先天性心脏病并肺动脉高压中的作用

附录　中英文缩略词汇表

致谢