Ym155对高肺血流量性肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

摘要

目的:通过构建野百合碱诱导合并腹主动脉-下腔静脉造瘘分流术的高肺血流量性肺动脉高压大鼠模型，探讨survivin抑制剂YM155是否能在体影响高肺血流量性肺动脉平滑肌细胞的增殖与凋亡。
　　方法:30只8-9周龄雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠采用随机数字法分为对照组、模型组和干预组，每组各10只。(1)对照组做皮下注射20％乙醇溶剂处理及开关腹手术;(2)模型组予以皮下注射1％野百合碱溶液，1周后实施腹主动脉-下腔静脉造瘘术，用此方法构建高肺血流量性肺动脉高压大鼠模型;(3)干预组在建模后，用survivin抑制剂1％YM155溶液灌胃2周。各组大鼠在相同条件下饲养5周，之后测量右心室压力、测算右心肥厚指数及光镜下观察肺组织HE染色，以此比较每组的大体差异。采用免疫组织化学法检测survivin蛋白在肺动脉的表达，用PCNA法检测肺动脉平滑肌细胞增殖率，用Tunel法检测肺动脉平滑肌细胞凋亡率。取各组肺动脉平滑肌组织进行原代肺动脉平滑肌细胞培养;用qRT-PCR检测肺动脉平滑肌细胞survivin mRNA的表达水平，western blot检测survivin蛋白的表达水平。
　　结果:(1)平均右心室压:模型组平均右心室压(37.48±1.89mmHg)较对照组(15.30±1.19mmHg)明显升高，差异有统计学意义（P＜0.05），干预组平均右心室压(27.10±1.93mmHg)较模型组降低，差异有统计学意义(P＜0.05)。
　　(2)右心室肥厚指数:模型组右心室肥厚指数(40.63±1.60％)较对照组(23.40±1.45％)显著增高，差异有统计学意义（P＜0.05)，干预组右心室肥厚指数(30.85±2.13％)较模型组降低，差异有统计学意义（P＜0.05）。
　　(3)肺组织HE染色:模型组的肺小动脉血管壁明显肌化并有不同程度的增厚，管腔有狭窄或接近闭塞，血管周围有炎性细胞浸润;干预组的肺小动脉可见血管壁肌化并有轻度的增厚，管腔未见明显狭窄，血管周围有少量炎性细胞浸润，对照组未见异常。
　　(4)Survivin蛋白在肺动脉的表达:模型组光密度值为4.27±0.90，干预组蛋白光密度值为1.40±0.45，二者比较差异有统计学意义(P＜0.05)，对照组未见表达。
　　(5)肺动脉平滑肌细胞增殖率和凋亡率:干预组增殖率(22.25±2.71％)与模型组(35.03±2.41％)相比，干预组明显低于模型组，差异有统计学意义（P＜0.05）。干预组凋亡率(30.92±2.39)％与模型组(10.21±1.47)％相比，干预组明显高于模型组，差异有统计学意义（P＜0.05）。
　　(6)肺动脉平滑肌细胞survivin mRNA表达水平:模型组相对表达量为1.35±0.09，干预组相对表达量为0.41±0.06，对照组未见表达，干预组与模型组相比，干预组明显低于模型组，差异有统计学意义(P＜0.05)。
　　(7)肺动脉平滑肌细胞survivin蛋白的表达水平:模型组相对表达量为1.36±0.12，干预组相对表达量为0.43±0.08，对照组未见表达，干预组与模型组相比，干预组明显低于模型组，差异有统计学意义（P＜0.05)。
　　结论:1、YM155能在体抑制高肺血流量性肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌细胞survivin的表达;2、YM155能在体抑制高肺血流量性肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖，促进其凋亡，改善肺血管重构。

目录

声明

个人简历

摘要

前言

材料与方法

1 实验材料

2 实验方法

实验结果

1 肺动脉高压大鼠模型结果

2 免疫组化结果

3 肺动脉平滑肌细胞培养及鉴定结果

4 肺动脉平滑肌细胞中survivin基因及蛋白的表达

讨论

结论

参考文献

附录

综述 肺动脉高压与肺血管重构病理学相关性

致谢

攻读硕士学位期间发表的学术论文