卵巢上皮癌耐泰素和非耐泰素细胞间差异表达基因与蛋白筛选鉴定研究

摘要

为了更好的认识卵巢癌的多药耐药机制，我们用泰素对卵巢卵巢浆液性乳头状腺癌细胞SKOV3进行间断、大剂量冲击，建立了卵巢癌耐药细胞株SKOV3/TS，并且从蛋白和基因两个水平筛选、鉴定了两种细胞间的差异蛋白分子。 第一部分：卵巢上皮癌泰素耐药细胞株相关生物学指标的检测验证研究 目的：对泰素耐药细胞株SKOV3frs进行相关生物学指标的检测验证。方法：MTT法检测SKOV3/TS对泰素的耐药指数及对健择、奥沙利铂、米托蒽醌、VP-16、异环磷酰胺的交叉耐药性；采用21天细胞计数法绘制细胞的生长曲线并计算其倍增时间。结论：SKOV3/TS表现出典型的多药耐药特征，该耐药模型十分稳定达到了后续的蛋白和基因实验的实验要求。 第二部分：卵巢上皮癌耐泰素类和非耐泰素类细胞间差异表达蛋白筛选鉴定研究研究 目的：比较卵巢上皮癌耐泰素类和非耐泰素类细胞间的蛋白表达差异，并进行相关蛋白的筛选和鉴定。方法：提取卵巢癌耐泰素细胞SKOV3frs和亲本细胞SKOV3的总蛋白，用蛋白二维液相分离色谱技术(ProtemeLabTM PF-2D)对总蛋白进行分级分离，然后用其自带的Proteovue和Deltavue分析软件进行两种细胞间差异蛋白的筛选； 用电喷雾离子化串联质谱(ESI-MS/MS)结合数据库比对进行差异蛋白的鉴定。结果：共分离筛选出差异蛋白12个，其中SKOV3/TS表达上调的12个，SKOV3表结论：PF-2D结合ESI-MS/MS是一种进行能够差异蛋白筛选、鉴定的有效方法。鉴定出的蛋白通过多种复杂机制介导了卵巢癌对泰素类的耐药性的产生，这些蛋白有可能成为疗效预测分子或新的治疗靶标。 第三部分：卵巢上皮癌耐泰素类和非耐泰素类细胞间差异表达基因筛选鉴定研究研究 目的：比较卵巢上皮癌耐泰素类和非耐泰素类细胞间的基因表达差异，并进行相关基因的筛选和鉴定。方法：采用人类全基因组表达谱芯片对卵巢癌耐泰素细胞SKOV3/TS和亲本细胞SKOV3进行差异基因的筛选和分析；用荧光定量RT-PCR对芯片结果进行核对验证。结论：基因芯片是分析肿瘤差异基因的一种高通量的强有力工具。卵巢癌的多药耐药是一个多种基因参与的复杂过程。

目录

论文说明:英文缩略词

声明

摘要

第一章卵巢恶性肿瘤多药耐药研究进展

1.1一线化疗药物及方案的选择

1.2影响化疗疗效的临床病理因素

1.3影响化疗疗效的分子病理因素

1.4卵巢癌耐药机制

1.5卵巢上皮癌多药耐药差异表达基因筛选鉴定现况

1.6卵巢上皮癌多药耐药差异表达蛋白筛选鉴定现况

1.7卵巢癌多药耐药的诊断以及治疗

1.8卵巢癌多药耐药的药物治疗

1.9多药耐药手术治疗

1.10复发性上皮性卵巢癌的生物学治疗

1.11多药耐药的逆转耐药治疗

1.12复发癌的化疗

1.13复发瘤的二次减瘤术

结语

第二章卵巢上皮癌耐泰素细胞系的验证

1.前言

2.材料与方法

2.1实验材料

2.2仪器与试剂

2.3主要试剂的配制

2.4实验方法

3.结果分析

3.1卵巢上皮癌耐泰素与非耐泰素细胞间耐药指数比较

3.2交叉耐药性

3.3细胞生长曲线

4.讨论

第三章卵巢上皮癌耐泰素与非耐泰素细胞间差异蛋白筛选鉴定研究

1.前言

2.材料与方法

2.1实验材料

2.2仪器与试剂

2.3卵巢癌细胞总蛋白的提取

2.4初始缓冲液置换细胞裂解上清液:PD-10脱盐柱法

2.5一维色谱聚集分析

3.结果

3.1SKOV3/TS和SKOV3细胞总蛋白的浓度测定结果

3.2样品制备

3.2一维色谱聚集结果

3.3重复性问题

3.4 SKOV3和SKOV3/TS细胞株的蛋白质表达差异的比较

3.5差异表达蛋白质点的质谱鉴定

4.小结

5.讨论

第四章卵巢上皮癌耐泰素和非耐泰素细胞间差异表达基因筛选鉴定研究

1.前言

2.材料与方法

2.1实验材料

2.2试剂

2.3仪器

2.4实验方法

3.结果与分析

3.1SKOV3/TS细胞与SKOV3细胞的基因芯片结果

3.2卵巢上皮癌耐泰素和非耐泰细胞间差异表达基因筛选结果

3.3荧光定量RT-PCR验证差异表达基因mRNA在卵巢上皮癌耐泰素和敏感细胞间的表达结果分析

3.4实时荧光定量RT-PCR检测结果

4.讨论

全文小结

参考文献

致谢