海带多糖LO1对内毒素致内皮细胞损伤的保护作用研究

摘要

目的：利用人脐静脉内皮细胞(HUVEC)体外培养模型，探讨海带海带多糖L01对内毒素刺激下，人脐静脉内皮细胞表达和分泌iNOS、eNOS、PGI2的影响，以及对内皮的细胞超微结构的影响，为研究和开发新型抗血栓药物提供理论和实验室依据。 方法：(1)体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)，随机分成7组，空白对照组(10％FCS)，L-L01对照组(10mg/L L01)、LMWH对照组(50U/mlLMWH)、模型组(40mg/L LPS)、L-L01低剂量组(40mg/L LPS+10mg/LL01)、H-L01高剂量组(40mg/L LPS+100mg/L L01)、LMWH组(40mg/LLPS+50U/ml LMWH)，培养48h，酶联免疫吸附分析(ELISA)法测定HUVEC培养上清夜中的iNOS、eNOS、6-Keto-PGF1α水平。(2)逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测各组HUVEC内iNOSmRNA、eNOSmRNA、PGISmRNA的表达，其扩增产物电泳后进行密度扫描及半定量分析。(3)电镜下观察各组细胞的超微结构。 结果：40mg/L的内毒素培养48h，可致HUVEC培养液中iNOS水平显著升高，eNOS、6-K-PGF1α水平显著降低(P<0.01，P<0.05)；HUVEC中eNOSmRNA、PGISmRNA表达水平显著下降，iNOSmRNA表达水平显著升高；HUVEC细胞核不规则，细胞间微绒毛减少、消失，线粒体(Mi)肿胀，嵴溶解消失，核旁溶酶体增多。而LMWH及不同浓度的L01可拮抗内毒素所致的各种变化。 结论：海带多糖L01可拮抗LPS对内皮细胞的作用，增多eNOS、6-K-PGF1α 的分泌，降低iNOS的分泌；上调eNOSmRNA、PGISmRNA的表达，下调iNOSmRNA的表达，从而升高eNOS/β-actine、PGIS/β-actine的比值，降低iNOS/β-actine的比值；从超微结构上改善LPS对内皮细胞的损伤。因此海带多糖L01可以从功能和形态两方面保护内皮细胞。

目录

论文说明：主要英汉缩略对照表

声明

摘要

前言

1.实验材料

2.实验方法

3结果

讨论

结论

附图

参考文献

NO及NOS的研究新进展

攻读学位期间发表的论文目录、课题资助

致谢