广西何首乌中蒽醌类化合物GXHSWAQ-1单体对鼻咽癌的放射增敏作用及其机制

摘要

目的：通过体内外实验研究广西何首乌中蒽醌类化合物GXHSWAQ-1对鼻咽癌的放射增敏作用，并探讨其体外放射增敏作用的机制。 方法：(1)采用MTT法检测不同浓度GXHSWAQ-1对CNE-1细胞的生长抑制率，确定无细胞毒作用的药物浓度。(2)通过克隆形成实验观察GXHSWAQ-1在无细胞毒作用的浓度下对乏氧CNE-1细胞的放射增敏作用。(3)通氮乏氧条件下，应用RT-FQ PCR技术检测放射增敏实验组和对照组CNE-1细胞中乏氧相关基因、DNA损伤修复基因以及凋亡相关基因的表达。(4)采用FCM检测放射增敏实验组和对照组的细胞周期分布、凋亡效应以及细胞内活性氧的含量。(5)通过皮下注射细胞悬液的方法构建人鼻咽癌裸鼠移植瘤模型，腹腔注射高低两个剂量的GXHSWAQ-1并联合移植瘤局部放射干预，检测裸鼠移植瘤瘤块最大径、计算绝对肿瘤生长延缓时间(AGD)和标准化肿瘤生长延缓时间(NGD)，求出增敏系数(EF); HE染色观察瘤组织石蜡切片的病理学改变，计算核分裂率。 结果：(1) GXHSWAQ-1对CNE-1细胞的增殖抑制作用较小，IC50为465μg/ml。GXHSWAQ-1在浓度低于62.5μg/ml时对CNE-1细胞无细胞毒作用(抑制率低于10％)。 (2)无细胞毒作用的浓度3.9μg/ml和7.8μg/ml的GXHSWAQ-1对乏氧CNE-1细胞具有放射增敏作用，增敏比分别为1.436和1.832，呈剂量依赖性。 (3)乏氧作用不同时间后细胞HIF-1αmRNA表达都明显升高(P<0.05)，而单独GXHSWAQ-1组HIF-1α表达无明显变化；与对照组比较单纯放疗能诱导KU70/80、Survivin和hTERT mRNA表达上调，放疗联合乏氧组对KU70/80、Survivin和hTERT的上调作用比单纯放疗组更明显；而在乏氧情况下GXHSWAQ-1组联合照射处理后与单纯放疗组比较KU70/80、Survivin和hTERT mRNA表达显著降低(P<0.05)。 (4)GXHSWAQ-1联合照射组CNE-1细胞G0/G1期(％)比率为49.03±1.63，G2/M期(％)比率为14.27±0.57，与单纯照射组的53.89±1.12、8.0±0.18，单纯加药组的72.19±3.736、5.81±0.15和对照组的66.13±4.02、3.57±0.77相比，差异显著(P<0.05)，细胞G2/M期阻滞明显。GXHSWAQ-1联合照射组CNE-1细胞的凋亡率(％)为22.78±1.6，高于单纯照射组19.92±2.0、单纯加药组16.58±0.8和对照组17.79±1.3(P<0.05)。GXHSWAQ-1作用乏氧CNE-1细胞12h、24h后ROS的含量和对照组比较，相对比值分别为2.82±0.23、3.17±0.35，显著高于单纯乏氧组的相对比值0.47±0.13、0.71±0.08(P<0.05); GXHSWAQ-1联合射线作用CNE-1细胞12h、24h后ROS的含量和对照组比较，相对比值为2.78±0.24、2.30±0.18，显著高于单纯照射组的相对比值2.17±0.23、1.54±0.27(P<0.05)。 (5)移植瘤实验结果：各组瘤块最大径倍增时间(d)分别为：对照组17.02±1.1、溶媒组17.14±0.6、12mg/kg GXHSWAQ-1组17.2±0.8、4mg/kg GXHSWAQ-1组17.4±1.0、单纯照射组21.3±1.14、12mg/kgGXHSWAQ-1联合照射组24.1±0.7、4mg/kg GXHSWAQ-1联合照射组24.17±0.6。对照组、溶媒组和单纯用药组组间无显著差异(P>0.05)；单纯照射组肿瘤生长受到一定程度的抑制，和对照组相比，肿瘤生长延缓时间为4.28d，差异有统计学意义(P<0.05);12mg/kg GXHSWAQ-1联合照射组和4mg/kg GXHSWAQ-1联合照射组的肿瘤生长明显受到抑制，肿瘤生长延缓时间分别为6.9d和6.77d，和对照组相比具有统计学差异(P<0.05)。增敏系数(EF)分别为1.612和1.601。对各组瘤块切片HE染色结果进行方差分析，结果表明，单纯照射组核分裂率为6.59±0.226(％)和对照组(6.08±0.8)比较没有差异(P>0.05)，高低两个剂量增敏组的核分裂率分别为3.80±0.455和3.43±0.34，与对照组比较，明显降低(P<0.05)。 结论：1、无细胞毒作用浓度的GXHSWAQ-1对鼻咽癌CNE-1细胞具有放射增敏作用，增敏机理可能与其抑制乏氧状态下亚致死性损伤修复和诱导细胞凋亡，引起G2+M期阻滞，提高细胞内活性氧含量有关。 2、实验中选取的高低两个剂量的GXHSWAQ-1对人鼻咽癌裸鼠移植瘤具有一定的放射增敏作用。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：主要英文缩略语

声明

前言

第一部分体外实验

实验Ⅰ：GXHSWAQ-1对人鼻咽癌CNE-1细胞的放射增敏作用

1材料与方法

2 结果

3 讨论

实验Ⅱ：GXHSWAQ-1对人鼻咽癌CNE-1细胞放射增敏作用机制的研究

1材料与方法

2结果

3讨论

参考文献

第二部分体内实验：GZHSWAQ-1对人鼻咽癌裸鼠移植瘤的放射增敏作用

1材料与方法

2结果

3讨论

参考文献

结 论

创新点

综述：放射增敏剂的研究概况

攻读硕士研究生学位期间参与的课题及完成的论文

致 谢