嘌呤受体信号转导途径在低分化鼻咽癌细胞背景氯通道活动中的作用

摘要

目的： 1)研究嘌呤受体在低分化鼻咽癌细胞(CNE-2Z)背景氯通道活动中的作用，探讨背景氯通道激活的P2Y嘌呤受体信号转导途径； 2)研究背景氯通道在CNE-2Z细胞基础容积调节中的作用；3)探讨P2Y嘌呤受体信号转导途径在CNE-2Z细胞基础容积调节中的作用。 方法： 1)用膜片钳技术记录CNE-2Z细胞全细胞背景氯电流，计算电流密度； 2)观察P2Y嘌呤受体阻断剂及ATP酶对背景氯电流的影响，计算抑制率； 3)用特制的灌流系统灌流细胞，用活细胞影像分析系统Q500MC和Scion Image图像记录分析软件定时拍摄、测量和计算细胞容积，观察氯通道阻断剂、氯离子置换及P2Y嘌呤受体拮抗剂对细胞容积的影响。 结果： 1)在等渗条件下，可记录到稳定的CNE-2Z细胞背景氯电流，电流密度分别为(5.19±0.83) pA/pF(+80 mV)和(-5.11±0.64) pA/pF(-80 mV)，内、外向电流密度无明显差异(t=0.17，P>0.05，n=29) 2) P2Y型嘌呤受体拮抗剂反应蓝2(reactive blue2，RB2)能显著抑制内、外向背景氯电流，其抑制效应呈剂量依赖性。细胞外50、100和200μmol/L RB2均可迅速抑制背景氯电流，抑制率随RB2浓度升高增大，且对外向背景氯电流的抑制作用均强于内向电流，差异有统计学意义(P<0.01)。洗脱RB2后电流可恢复。 3) ATP酶(apyrase)可抑制背景氯电流。胞外20 units/mL apyrase分别抑制外向背景氯电流(72.21±10.51)％(+80 mV)(t=3.27，P<0.05)和内向背景氯电流(62.35±14.08)％(-80 mV)(t=-3.00，P=0.058，n=4)，其对外向和内向背景氯电流的抑制作用间的差异无统计学意义(t=-2.23，P>0.05)。洗脱apyrase后电流可恢复。 4)细胞外灌流含氯通道阻断剂5-nitro-2-3-phenylpropylamino benzoic Acid(NPPB，50μmol/L)的等渗液时，细胞容积增大(8.45±1.65)％(t=7.02，P<0.01，n=8)。 5)细胞外灌流不含氯离子的等渗液时，细胞容积减小(7.66±1.34)％(t=11.99,P<0.01, n=8)。 6)细胞外灌流含100μmol/L RB2的等渗液时，细胞迅速增大，细胞容积增加(16.03±1.21)％(t=11.80，P<0.01，n=10)。洗脱RB2后细胞容积可恢复至原大小。 结论：低分化鼻咽癌细胞在等渗条件下存在稳定的背景氯通道活动，P2Y嘌呤受体信号转导途径在等渗条件下背景氯通道活动过程中起重要作用，氯通道参与等渗状态下细胞基础容积的调节过程；CNE-22细胞可能通过释放ATP作用于细胞膜P2Y嘌呤受体，进而激活氯通道，从而对细胞基础容积进行调节。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：主要英汉缩略对照表

声明

1 前言

1.1研究背景

1.1.1离子通道

1.1.2背景氯通道与背景氯电流

1.1.3背景氯通道与细胞容积调节

1.1.4 ATP、嘌呤受体与氯通道激活

1.2研究目的

1.3研究内容

2 材料与方法

2.1材料

2.1.1人低分化鼻咽癌细胞(CNE-2Z)

2.1.2主要仪器和设备

2.1.3主要药品和试剂

2.2方法

2.2.1细胞培养

2.2.2膜片钳技术

2.2.3检测背景氯电流的实验程序

2.2.4细胞容积测量

2.2.5统计分析

3 结果

3.1腺苷受体信号途径与背景氯电流的激活

3.1.1背景氯电流的记录

3.1.2 P2Y腺苷受体拮抗剂对背景氯电流的影响

3.1.3 ATP酶对背景氯电流的影响

3.2背景氯电流在细胞容积调节中的作用

3.2.1氯通道阻断剂对细胞容积调节的影响

3.2.2氯离子置换对细胞容积调节的影响

3.2.3 P2Y腺苷受体拮抗剂对细胞容积调节的影响

4 讨论

4.1背景氯通道活动与P2Y嘌呤受体途径

4.1.1背景氯电流的特点

4.1.2 P2Y嘌呤受体拮抗剂对背景氯电流的抑制作用

4.1.3 ATP酶对背景氯电流的影响

4.2背景氯电流对细胞容积的调节

4.3 P2Y嘌呤受体拮抗剂对细胞容积的影响

小结

参考文献

文献综述 凋亡相关氯通道激活的影响因素

致谢

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