金环蛇毒细胞毒素的分离纯化及其抗肿瘤作用的实验研究

摘要

目的：从金环蛇毒中分离纯化细胞毒素，并测定其抗肿瘤活性。
　　 方法：采用低温高速离心法对金环蛇毒进行层析前的预处理，取上清溶液，经Sephadex G-75柱进行洗脱，收集各组分，将各组分进行红细胞溶血试验，初步筛选具有细胞毒素作用的组分。将具有细胞毒素作用的活性峰溶液经CM-Sepharose CL-6B离子交换柱进行梯度洗脱，收集各组分。将各组分溶液进行小鼠毒性实验和离体豚鼠心脏灌流实验，鉴定活性蛋白质峰的细胞毒性作用。将有细胞毒性的蛋白质峰溶液进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，鉴定蛋白质纯度及测定分子量。采用MTT法检测该细胞毒素活性组分对体外培养肿瘤细胞生长的影响。
　　 结果：金环蛇毒粗毒经Sephadex G-75柱洗脱获得4个蛋白质峰，其中蛋白质峰Ⅱ、Ⅲ溶液可致红细胞重度溶血，表明其具有细胞毒作用。将蛋白质峰Ⅱ、Ⅲ溶液经CM-Sepharose CL-6B离子交换柱进行梯度洗脱，获得A、B、C、D、E、F、G、H、I、J 10个蛋白质峰，对10个蛋白质组分进行小鼠毒性实验及豚鼠离体心脏灌流实验，结果显示，蛋白质峰C组分和蛋白质峰D组分均可致小鼠死亡，能使离体豚鼠的Langen-dorff心脏收缩力短暂增强后迅速减弱，心率减慢，心脏挛缩，最后停搏，呈现明显的心脏毒素作用，而其它蛋白质峰组分对豚鼠离体心脏无明显毒性作用。对蛋白质峰C和蛋白质峰D组分进行聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，均显示单一条带，分子量为7000～8000da。体外抑瘤实验结果显示，不同浓度的蛋白质峰C和D组分对MGC-803细胞、Hela细胞、BEL-7402细胞均有明显的生长抑制作用，随着药物质量浓度的增加，对三株肿瘤细胞的生长抑制作用逐渐增强，呈一定的浓度依赖性关系。当质量浓度为5.0μg/ml、10.0μg/ml时，蛋白质峰C组分和D组分对MGC-803细胞、Hela细胞、BEL-7402细胞三株肿瘤细胞的生长抑制率与5-Fu对照组比较，差异均有显著意义(P＜0.01)。而在同一质量浓度下，蛋白质组分C和蛋白质组分D对三株肿瘤细胞的生长抑制率比较，差异均无显著性(P＞0.05)。蛋白质峰C组分对MGC-803细胞、Hela细胞、BEL-7402细胞作用24h的IC50分别为0.857μg/ml、0.406μg/ml、0.287μg/ml；蛋白质峰D组分对MGC-803细胞、Hela细胞、BEL-7402细胞作用24h的IC50分别为0.502μg/ml、0.417μg/ml、0.704μg/ml。
　　 结论：应用凝胶过滤、离子交换等方法可以从金环蛇毒中分离纯化获得具有抗肿瘤活性的细胞毒素。本研究证实了金环蛇蛇毒细胞毒素的抗肿瘤作用，为临床开发金环蛇蛇毒抗肿瘤制剂提供实验依据。

目录

文摘

英文文摘

论文说明:常用缩略词中英文对照

声明

前 言

一、金环蛇毒细胞毒素的分离纯化

1.实验材料

2.方法

3.结果

二、金环蛇毒细胞毒素的抗肿瘤作用

1.实验材料

2.方法

3.结果

三、讨论

参考文献

文献综述1:蛇毒的抗肿瘤作用及其应用研究

文献综述2:金环蛇毒细胞毒素抗肿瘤研究现状的分析

致 谢

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