应用跨种属筛选策略探寻人类肝癌的关键分子及候选分子E-FABP的差异表达验证

摘要

目的：应用跨种属策略筛选影响肝癌发生发展的候选关键分子，并通过对候选分子的差异表达验证和进一步的功能研究定位出关键分子，从而为肝癌的防治和早期诊断提供分子靶标、为阐释肝癌的发生机制提供依据。
　　 方法：1.对本课题组前期经基因芯片及二维电泳和质谱技术筛选的树鼩和大鼠肝癌差异表达基因和蛋白数据进行整理，并在此基础上对MEDLINE、中国知网、重庆维普等国内外数据库进行广泛的文献搜索，搜集多种种属的肝癌差异表达基因和蛋白数据，建立肝癌差异表达分子的跨种属数据集。2.从以上数据集中首批筛选出E-FABP等4个跨种属共同差异表达的候选分子，应用RT-PCR技术验证其在人肝癌、癌旁及正常肝组织中的表达情况。3.选取以上检测中差异表达最显著的候选分子E-FABP，应用RT-PCR技术检测其在较大样本量的人、树鼩和大鼠肝癌及其相应的癌旁和正常肝组织中的mRNA水平的差异表达情况，以及应用Westernblot及免疫组织化学染色方法检测其在这些组织中的蛋白质水平的差异表达情况。4.进行E-FABP表达情况与肝癌患者的临床病理特征、血清甲胎蛋白(AFP)水平的相关性分析。
　　 结果：1.建成跨物种的肝癌相关基因数据集，其中含45个在人、树鼩、大鼠或小鼠肝癌中共同差异表达基因。2.首批筛选出4个较明显的跨种属差异表达的肝癌相关候选分子：表皮型脂肪酸结合蛋白(E-FABP)、肝型脂肪酸结合蛋白(L-FABP)、转羟乙醛酶(TKT)、和细胞角蛋白8(CK8)，用RT-PCR方法验证其在人肝癌组织中的差异表达；结果显示E-FABP的差异表达最显著。3.在较大样本(60例人肝癌、癌旁和15例人正常肝组织，20例树鼩肝癌、癌旁和15例树鼩正常肝组织，以及10例大鼠肝癌、癌旁和10例大鼠正常肝组织)进一步用RT-PCR方法跨种属地验证E-FABPmRNA的差异表达情况，结果与前相符；Westernblot和免疫组织化学染色检测在以上三种种属的肝癌、癌旁和正常肝组织的E-FABP蛋白表达情况，结果与mRNA水平的差异表达一致，也为在肝癌中表达上调。4.E-FABP表达水平与肝癌患者的临床病理特征的关系分析显示，E-FABP与癌的转移有关，E-FABP和AFP联合检测有可能提高肝癌的早期诊断率。
　　 结论：1.E-FABP在人、树鼩和大鼠三个种属的肝癌组织中的表达水平均高于相应的癌旁及正常肝组织，因此E-FABP可能是与肝癌发生发展相关的重要分子，具有作为预测肝癌转移、早期诊断肝癌的生物标志的应用前景；2.跨种属筛选策略有望加速人类肿瘤关键分子的研究进展。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：主要英文缩写

声明

前言

材料与方法

结果

讨论

全文小结

参考文献

综述　应用跨种属肿瘤基因筛选策略探寻肿瘤关键分子

致谢