水杨酸钠对耳蜗螺旋神经节神经元NMDA受体内化作用的影响

摘要

目的:探讨水杨酸钠对耳蜗螺旋神经节神经元(spiral ganglion neurons，SGN)的NMDA受体(N-methyl-D-as-partate)的表达情况，及其对受体内化的影响;并初步探讨NMDA受体内化作用在水杨酸钠诱导的耳蜗毒性中的作用机制，明确SGN自身对水杨酸钠介导的耳毒性是否具有一定的调控作用。
　　方法:分离取出大鼠蜗轴螺旋管，用酶消化法原代培养SGN，免疫荧光染色检测SGN具有NMDA受体亚单位NR1的表达;然后采用细胞表面生物素化标记SGN表面蛋白，分别提取SGN表面蛋白与总蛋白，采用Western blot检测水杨酸钠作用5min、15min、30min、1h、3h、6h不同时间段SGN的NMDA受体亚单位NR1总蛋白及表面蛋白表达情况。
　　结果:通过免疫荧光观察到原代培养的SGN上有NMDA受体亚单位NR1的表达。通过western blot技术检测到:和空白对照组相比，浓度为5mM的水杨酸钠处理SGN5min、15min、30min前后，SGN总的NR1蛋白表达没有明显改变(p＞0.05)，但是SGN表面蛋白中NR1表达量明显下降(P＜0.05)，这提示细胞表面NR1的内化作用明显。随着水杨酸钠处理时间的延长（1h-6h），SGN总的NR1蛋白表达明显增加(P＜0.05)，呈一定的时间依赖关系。而此时增强的NR1内化作用趋于稳定。动力蛋白抑制肽(Dynamininhibitory peptide，DIP)对水杨酸钠增强的NR1内化作用有明显的抑制作用。
　　结论:水杨酸钠作用SGN早期可增加NMDA受体内化作用，后期增加NMDA受体表达，水杨酸钠增强的NMDA受体内化是受动力蛋白或者网格蛋白调节。

目录

声明

缩略词表

摘要

前言

1．材料

1．1 实验动物

1．2 实验试剂

1．3 主要仪器

2．方法

2．1 药物准备

2．2 原代培养SGN

2．3 免疫荧光染色

2．4 细胞表面蛋白及总蛋白的提取

2．5 NMDA受体亚单位NR1表面蛋白和总蛋白Western Blot检测

2．6 统计学分析

3 结果

3．1 原代培养的SGN及鉴定

3．2 免疫荧光检测NR1的表达

3．3 SGN中NR1表达的western blot检测

4 讨论

小结

5 结论

参考文献

综述

致谢

攻读学位期间发表的学术论文