AEG-1及其相关微小RNA miR-136在非小细胞肺癌中的表达及意义

摘要

目的:
　　肺癌(Lung cancer, LC)是中国最常见的癌症并其死亡率位列各种恶性肿瘤的首位。LC分为小细胞肺癌(Small cell lung cancer，SCLC)及非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer，NSCLC)，而NSCLC又分为腺细胞癌(Adenocarcinoma，AC)、鳞状细胞癌(Squamous cell carcinoma，SCC)及大细胞癌(Large cell cancer，LCC)。NSCLC约占LC病例的75～80％，而且NSCLC的恶性程度高，预后差，这与恶性肿瘤的调节分子密切相关。星型细胞上调基因-1(Astrocyte elevated gene-1，AEG-1)近年来作为潜在的恶性肿瘤调节分子被发现，有关AEG-1与NSCLC中的关系的报道仅有9篇，但仍未清楚AEG-1在NSCLC中的作用及作用机制。在NSCLC中，恶性肿瘤调节分子发挥其作用往往与微小RNA(microRNA，miRNA)存在密切的关系，本课题前期通过生物学预测软件发现miR-136的序列与AEG-1存在互补关系，推测AEG-1与miR-136存在相互作用关系，因此本课题旨在采用组织芯片技术、细胞蜡块、免疫印迹技术(Western bolt，WB)、划痕实验、集落形成实验、Transwell实验，成瘤实验及qRT-PCR实验阐明AEG-1及其miR-136在NSCLC中的作用及意义并初步揭示AEG-1与miR-136的互相作用关系。
　　方法:
　　1、采用组织芯片技术检测369例NSCLC组织样品中AEG-1的表达水平，分析其表达与NSCLC的临床组织病理学特征的关系。
　　2、利用细胞蜡块，WB技术从H460、H1299、A549、PC9肺癌细胞株中筛选出AEG-1表达最强的肺癌细胞株，用shRNA质粒沉默肺癌细胞株的AEG-1表达。
　　3、使用划痕实验、集落形成实验、Transwell实验从体外角度说明AEG-1在NSCLC侵袭、增殖、迁移上的作用。
　　4、利用鸡胚绒毛尿囊膜（Chick chorioallantoic membrane，CAM）构建NSCLC鸡胚绒毛尿囊膜移植瘤模型从动物模型的角度模拟人体NSCLC的生长发展，进一步阐明AEG-1在NSCLC的生物学作用。
　　5、收集65例NSCLC组织qRT-PCR的方法检测miR-136的表达水平，用生物信息学的方法预测miR-136与AEG-1的关系。
　　结果:
　　1.AEG-1在NSCLC组织中表达显著高于非癌组织(p=0.004)，其表达水平在肿瘤大小(p=0.000)、TNM分期(p=0.003＜0.05)及淋巴结转移(p＜0.000)中均有差异，Spearman指数分析指出AEG-1的表达水平与肿瘤大小(r=0.248，p=0.000)及TNM分期(r=0.182，p=0.001)呈正相关。
　　2、划痕实验、集落形成实验、Transwell实验分别说明沉默AEG-1表达的NSCLC细胞株的侵袭、增殖及迁移能力被抑制。
　　3、NSCLC鸡胚绒毛尿囊膜移植瘤模型实验进一步说明沉默了AEG-1表达的NSCLC细胞株缺乏在CAM上成瘤的能力。
　　4、miR-136在NSCLC组织中表达显著低于非癌组织(p=0.002)，其表达水平在TNM分期(p=0.001)、淋巴结转移(p=0.001)中均有差异，Spearman指数分析指出miR-136的表达水平与TNM分期(r=-0.376，p=0.002)及淋巴结转移(r=-0.400，p=0.001)呈负相关。
　　5、AEG-1部分序列与miR-136互补，两者呈负相关（r=-0.494，P=-0.000）。
　　结论:
　　AEG-1的高表达可能促进NSCLC的生长发展、浸润、增殖及迁移，抑制AEG-1的表达有望成为治疗NSCLC的新型方法，并AEG-1有可能成为miR-136在NSCLC中的靶基因。

目录

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摘要

前言

第一部分 AEG-1在NSCLC中的表达、临床意义及生物学作用

一、AEG-1在NSCLC中的表达及临床意义

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

5 结论

二、AEG-1在NSCLC中的生物学作用

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

5 结论

第二部分 miR-136在NSCLC中的表达及意义及其与AEG-1的相互关系

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

5 结论

全文结论

参考文献

附录

综述 肺癌的实验动物模型研究进展

致谢

攻读硕士期间发表(投稿)的论文