心衰康及其拆方对慢性心衰大鼠心功能及尿液AQP2、下丘脑AVP影响的研究

摘要

目的：观察心衰康及其拆方对慢性心力衰竭（CHF）大鼠一般情况及尿量的影响；测定慢性心衰大鼠的心功能及尿液水通道蛋白2（AQP2）、下丘脑精氨酸血管加压素（AVP），探讨心衰康及其拆方对心衰大鼠水液代谢的影响。
　　方法﹕选取体重250g左右的Wistar大鼠，用冠状动脉结扎术的方法制作慢性心衰动物模型，术后4周行超声心动图检查，将左心室射血分数≤45％的心衰大鼠纳入实验。将纳入实验的心衰大鼠随机分为6组，分别为模型组、心衰康全方组、益气组、温阳组、活血组、利水组，另设假手术组。心衰康全方组给予心衰康全方灌胃，益气组、温阳组、活血组、利水组分别给予心衰康全方中的益气、温阳、活血、利水药物灌胃，模型组给予同等剂量超纯水灌胃。假手术组用超纯水灌胃作为空白对照组。分2批进行实验，第1批灌药4周、第2批灌药8周，观察动物行为学、尿量，行心脏超声测定心功能，采用苏木精-伊红染色法（HE染色法）观察心脏、肾脏病理学改变；双抗体夹心 ELISA法测定心衰大鼠尿液 AQP2浓度；实时荧光定量 PCR法检测各组心衰大鼠下丘脑 AVP的表达。
　　结果﹕
　　1．对各组大鼠动物行为学和24小时排尿量进行观察：各用药组与模型组比较，均能改善大鼠一般情况；在对心衰大鼠进行药物干预4周后，利水组的利尿作用与益气、温阳、活血组比较有差异。药物干预8周后利水组与其他拆方组比较尿量无差异，且利水组8周与4周相比增加尿量的幅度较其他各药物干预组小；心衰康组、益气组、活血组、利水组与模型组比较，有统计学差异，其中以心衰康全方和心衰康拆方中的利水药对心衰大鼠利尿作用最为明显。
　　2．超声心动图评价：对心衰大鼠药物干预4周后，与模型组大鼠比较，心衰康全方组及益气、活血拆方组大鼠LVEF明显升高，其中以心衰康全方组最为明显，而温阳、利水拆方组大鼠LVEF升高无显著差异性。8周大鼠中，与模型组大鼠比较，心衰康组、益气组、温阳组、活血组、利水组左室射血分数明显增加，表明心衰康全方及益气、活血、温阳、利水拆方均可改善心梗后心衰大鼠心功能，其中以心衰康全方最为明显。并且随着用药时间的延长，温阳、利水拆方也有提高左室射血分数的作用，但这种作用较益气、活血药物弱。
　　3． HE染色法观察心脏、肾脏病理学改变：与模型组比较，心衰康全方组、活血组、益气组对心衰大鼠心脏病理有改善作用；心衰康全方组、活血组、益气组、利水组、温阳组对心衰大鼠肾脏病理有改善作用。4周组与8周组比较，心衰康全方组、益气组和活血组随着用药时间的延长，其改善心脏及肾脏病理改变的作用在增强。
　　4．尿液水通道蛋白2的检测：在对心衰大鼠进行药物干预4周后，大鼠尿液中水通道蛋白2的含量较模型组比较均降低，其中心衰康全方组作用最明显，利水组次之，且利水组较其他拆方组比较均有差异；而药物干预8周后，心衰康全方组的效果同样最为明显，而利水组效果与益气、温阳、活血组类似。表明随着用药时间的延长，益气、温阳、活血药对水通道蛋白2的抑制作用逐渐增强，而利水药作用无明显改变。联系心功能指标，这一结果与其长期应用改善心功能、改善肾脏供血、从而对水液代谢产生影响有关。
　　5．实时荧光定量 PCR法测定下丘脑精氨酸血管加压素（AVP）mRNA：在对心衰大鼠进行药物干预4周后，大鼠下丘脑精氨酸血管加压素（AVP） mRNA表达：心衰康组、益气组、活血组、利水组与模型组比较有统计学差异，表明心衰康全方以及拆方中的益气、活血、利水药物均能降低下丘脑精氨酸血管加压素（AVP） mRNA表达，而其中以全方组及利水组效果明显，与益气、温阳、活血组比较有差异。而药物干预8周后，心衰康全方组以及益气、温阳、活血、利水组同样能够降低大鼠下丘脑精氨酸血管加压素（AVP） mRNA表达，且各拆方组之间比较无差异，结合整个研究结果分析，心衰康及其拆方可能通过降低下丘脑AVPmRNA的表达，影响肾脏 AVP受体，作用于肾脏 AQP2，从而进一步增加心衰大鼠的排尿量。
　　结论﹕
　　1．心衰康及其拆方均能改善心衰大鼠的一般情况，减轻心梗后心肌损伤程度，减轻肾脏组织的损伤，提高左室射血分数，能够改善心衰大鼠心功能，且随着药物干预时间的延长，这种改善作用更加明显。
　　2．心衰康及其拆方能够降低尿液水通道蛋白2的浓度，随着用药时间的延长，益气、温阳、活血药对水通道蛋白2的抑制作用逐渐增强。
　　3．心衰康及其拆方对慢性心衰的治疗作用与其改善心功能、降低下丘脑 AVPmRNA的表达，从而增加排尿量有关。
　　4.对于慢性充血性心力衰竭大鼠动物模型，以红参、黄芪为组方的益气药物单独应用可以增加心衰大鼠的尿量，与模型组相比，尿液中水通道蛋白2的浓度降低，其机制可能与降低下丘脑 AVPmRNA的表达有关。
　　5．对于慢性充血性心力衰竭大鼠动物模型，以附子、桂枝为组方的温阳药物单独应用可以增加心衰大鼠的尿量，与模型组相比，尿液中水通道蛋白2的浓度降低，其机制可能与降低下丘脑 AVPmRNA的表达有关。
　　6.对于慢性充血性心力衰竭大鼠动物模型，以红花、丹参、赤芍为组方的活血药物单独应用可以增加心衰大鼠的尿量，与模型组相比，尿液中水通道蛋白2的浓度降低，其机制可能与降低下丘脑 AVPmRNA的表达有关。

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英汉对照

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前言

材料与方法

1. 实验动物

2．实验药品

3．实验器材

4. 实验方法

5. 统计学处理

结果

1. 动物模型评价

2. 动物行为学观察

3. 动物尿量观察

4. 药物干预 4 周、8 周动物超声心动图评价

5. 动物心脏、肾脏一般组织学苏木精-伊红染色（ HE 染色）检测

6. 尿液水通道蛋白 2 检测

7. 下丘脑精氨酸血管加压素（ AVP） mRNA 检测

讨论

1. 古代中医对心衰的认识

2．现代中医对心衰的认识

3．充血性心力衰竭模型

4．抗心衰中药心衰康的选择

5. 心衰康及其拆方对慢性心衰大鼠心功能的影响

6. 心衰康及其拆方对心衰大鼠尿量的影响及利尿机制的探讨

7. 阳、气、血与水液代谢关系的研究

结论

致谢

参考文献

附录 1 病理学照片

附录 2 文献综述一:慢性心力衰竭水钠潴留机制研究进展

附录 3 文献综述二: 中医治疗慢性心衰的研究进展