Th9细胞在乙型肝炎肝硬化患者中的表达及意义

摘要

目的：研究Th9细胞在乙型病毒性肝炎肝硬化患者中的表达和作用，研究Th9细胞在乙型病毒性肝炎肝硬化患者中的表型以及CCL20/CCR6趋化轴对Th9细胞可能影响，探讨它们是否参与肝纤维化的发病机制。
　　方法：收集30例乙型病毒性肝炎肝硬化患者和10例健康捐献者的外周血，收集18例乙型病毒性肝炎肝硬化肝组织和6例正常的肝组织。流式细胞术检测外周血中IL-9+IL-22-CD4+T(Th9)细胞的比例以及Th9细胞的表型;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清IL-9和CCL20的水平;肝组织石蜡切片免疫组化检测趋化因子CCL20和其受体CCR6以及α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin，α-SMA)的表达。分析Th9细胞、IL-9及CCL20/CCR6趋化轴与肝纤维化的相关性。
　　结果：(1)流式细胞术检测显示:乙型病毒性肝炎肝硬化组外周血Th9细胞的比例(3.55％±1.69％)较正常对照组(0.97％±0.24％)明显升高。乙型病毒性肝炎肝硬化组Th9细胞中CCR4+Th9细胞，CCR6+Th9细胞的比例较正常对照组显著升高(分别是85.8％±12.5％ vs.56.4％±2.36％;78.1％±10.6％vs.56.4％±9.04％)，差异均有统计学意义（P均＜0.05）。(2)酶联免疫吸附试验检测结果显示:乙型病毒性肝炎肝硬化组血清IL-9和CCL20的水平较正常对照组显著升高（分别为:25.55±4.62vs.16.18±1.32pg/ml;224.77±33.73 vs.34.58±3.72 pg/ml），差异均有统计学意义(P均＜0.05)。(3)免疫组织化学染色分析结果显示:CCR6表达在汇管区中浸润的淋巴细胞的细胞膜，CCL20表达在汇管区树突状细胞、肝星状细胞、成纤维细胞、血管内皮细胞和胆管上皮细胞的细胞膜和细胞质。与正常对照组相比，乙型病毒性肝炎肝硬化组CCR6和CCL20表达均显著增高(0.027±0.021 vs.0.006±0.001,0.033±0.011 vs.0.017±0.006，均P＜0.05)。此外，与对照组相比，肝硬化组α-SMA表达明显增加(0.054±0.018 vs.0.007±0.001，P＜0.05)。(4)乙型病毒性肝炎肝硬化组Th9细胞的比例与凝血酶原时间和总胆红素水平呈正相关性（r值分别为0.725，0.617），差异均有统计学意义（P均＜0.05）;α-SMA和CCR6、CCL20表达呈正相关(r=0.492、0.516，均P＜0.05);血清中IL-9的水平与CCL20水平呈正相关性(r值为0.47，P＜0.05)。
　　结论：(1)Th9细胞和IL-9可能参与乙型病毒性肝炎肝硬化的发病机制，(2)在乙型病毒性肝炎肝硬化微环境中Th9细胞高表达CCR4和CCR6;(3)CCL20/CCR6趋化轴可能在Th9细胞募集的过程中发挥作用。

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摘要

前言

材料与方法

1．材料

2 研究方法

结果

1 外周血Th9细胞的比例

2 Th9细胞的趋化因子受体的表达

3 血清IL-9和CCL20的表达水平升高

4 免疫组织化学染色检测肝脏组织中α-SMA、CCR6和CCL20的表达

5 Th9细胞比例、血浆IL-9、CCR6、CCL20、α-SMA等关联性分析

讨论

1．乙型病毒性肝炎肝硬化样本的选择

2．乙型病毒性肝炎肝硬化组和正常对照组Th9细胞的表达情况

3．外周血血清中IL-9的表达

4．Th9细胞比例和血清IL-9水平与乙型病毒性肝炎肝硬化患者临床特点的相关性

5．Th9细胞表达的趋化因子受体

6．CCR6／CCL20趋化轴

7外周血血清IL-9和COL20水平的相关性分析

8．不足之处

结论

参考文献

综述 Th9细胞的研究进展

致谢

攻读学位期间发表的学术论文