新发家族性阿尔茨海默病早老素-1基因(presenilin-1，PS1)N24S突变对APP和Notch通路作用的研究

摘要

目的：研究早老素-1基因(presenilin-1，PS1)PS1-N24S突变位点对APP和Notch通路的影响，从而探索该位点突变对家族性阿尔茨海默病的致病机制。
　　方法：纳入105例临床确诊的SAD(sporadic Alzheimer's disease，SAD)病人和107例健康体检者，进行PS1-N24S突变位点病例对照研究;PCR扩增PS1基因第三外显子并进行基因测序分析。随后，以pcDNA3.1(Zeo+)/PS1野生型质粒构建pcDNA3.1(Zeo+)/PS1-N24S突变，并通过lip2000转染N2a-APP695稳转细胞系，构建N2a-APP695/PS1-N24S双转基因模型;以western-blots检测N2a-APP695/PS1细胞培养基上清中的APPβ、APPα，以Elisa检测培养基上清的Aβ;细胞总蛋白提取后，以western-blots检测其PS1基因表达、BACE-1、APP-CTFs、Notch、NICD;从而检测PS1-N24S位点突变对APP/Notch通路水解的影响。
　　结果：在105例SAD病人及107例健康体检者中没有发现PS1-N24S的突变位点。双转染细胞模型中，PS1-N24S突变组与空白对照及WT阴性对照组相比BACE-1、APPβ、APP-CTFs、Aβ40、Aβ42明显增高(p＜0.05)，与E280A阳性对照没有明显差异(P＞0.05)，PS1-N24S位点突变对Notch通路的水解作用在空白对照及WT阴性对照组以及E280A阳性对照没有明显差异(P＞0.05)
　　结论：新发PS1-N24S位点突变能够增加BACE-1表达，从而促进APP水解代谢使APPβ、CTFs、Aβ42、Aβ40产生增多，然而对Notch通路无明显作用。

目录

声明

摘要

前言

第一部分：病例对照研究SAD患者与健康对照PS1基因24位密码子发生突变情况，验证是否存在PS1-N24S位点多态性突变

1．研究对象资料

2．主要试剂和相关仪器

3．实验方法

4．实验结果

5．讨论

第二部分：pcDNA3．1(zeo+)／PS1-WT质粒构建pcDNA3．1(zeo+)／PS1-N24S突变

1．实验材料

2．主要试剂和相关仪器

3．实验方法

4．结果

讨论

第三部分 PS1-N24S基因突变功能验证

1．实验材料

2．实验主要试剂与仪器

3．实验方法

4．实验结果

5．讨论

参考文献

综述 PSEN1基因与家族性阿尔茨海默病

中英文缩略词对照表

致谢

攻读硕士研究生期间撰写的文章