异基因造血干细胞移植后口腔cGVHD患者T细胞相关细胞因子表达水平的初步研究

摘要

目的：调查异基因造血干细胞移植（allogeneic hematopoietic stem cell transplantation，Allo-HSCT）后，患者罹患口腔慢性移植物抗宿主病（chronic graft-versus-host-disease，cGVHD)情况，并测定T细胞相关细胞因子[Th1（IFN-γ、IL-12）、Th2（IL-4、IL-6、IL-10）、Th17（IL-17A、IL-23）、Treg（TGF-β）]表达水平，初步分析及探讨其相互关系，探究口腔cGVHD的发病机制，寻找具有临床指导意义的免疫指标。
　　方法：本研究纳入Allo-HSCT100天以上的90例患者作为移植组，包括因重型β地中海贫血移植的患者44例（地贫组）及因白血病移植的患者46例（白血病组），两组中诊断为口腔cGVHD各21例。对所有患者进行问卷调查，收集病史资料，同时进行口腔检查，根据2014年美国国立卫生研究院（National Institutes of Health，NIH）制定的诊断及口腔表征评分标准，目测类比疼痛评分（visual analogous scale，VAS）标准进行口腔cGVHD诊断及评分。所有研究对象均采集外周静脉血。白血病组中诊断为口腔cGVHD并完成非刺激性全唾液（unstimulated whole saliva，UWS）采集的患者为18例，地贫组基本上是低龄儿童，未进行唾液采集。选取与白血病组中诊断为口腔cGVHD并完成UWS采集的患者年龄、性别匹配的18例健康人作为对照组，采集外周静脉血和UWS。采用流式液相多重蛋白定量技术（cytometric bead array，CBA）对血清和唾液进行T细胞相关细胞因子IFN-γ、IL-12、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17A检测，采用酶联免疫吸附试验（enzyme-linked assay，ELISA）对IL-23、TGF-β进行检测。所得数据采用SPSS16.0软件immunosorbent进行分析。T细胞相关细胞因子IFN-γ、IL-12、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17A、IL-23、TGF-β采用中位数和四分位数间距描述，口腔表征计分和VAS计分采用均数和标准差描述。移植组组内之间，与健康对照组之间T细胞相关细胞因子IFN-γ、IL-12、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17A、IL-
　　23、TGF-β的差异采用两独立样本秩和检验。各临床和免疫指标间关联性分析采用Spearman秩相关分析，变量进一步应用logistic逻辑回归模型进行多因素分析。
　　结果：
　　1、cGVHD患者口腔临床表征：Allo-HSCT后地贫组和白血病组中口腔cGVHD患病率分别为47.73％和45.65%。患者主诉主要为口干、疼痛。所有患者都有明显的网状白色条纹样病损，其它常见病损类型分别为溃疡、糜烂和红斑样病损，另外少数合并水疱、舌乳头萎缩、唇疱疹、唇皲裂、假膜或张口受限等。两组cGVHD患者口腔表征平均计分分别为3.95±1.77（地贫组）和3.52±2.32（白血病组），VAS平均计分分别为2.90±2.30（地贫组）和3.43±1.81（白血病组），差异均无统计学意义，并且口腔表征计分与VAS计分关联性分析无统计学差异。
　　2、Allo-HSCT后患者有/无口腔cGVHD组血清中细胞因子表达：地贫组及白血病组内，相较于无口腔cGVHD组，有口腔cGVHD组血清IL-4、IL-6、IL-10、IL-23水平均升高，TGF-β水平下降；IL-6、IL-23与TGF-β水平呈负相关关系，口腔表征计分与IL-6、IL-23水平呈正相关关系，与TGF-β水平呈负相关关系。多因素分析结果提示，口腔cGVHD与IL-23水平呈正相关关系，与TGF-β水平呈负相关关系。
　　3、Allo-HSCT后白血病组内口腔cGVHD患者与健康对照组血清及唾液中细胞因子表达：相较于健康对照组，白血病组内口腔cGVHD患者血清IL-4、IL-6、IL-10水平升高；唾液IL-6、IL-10水平升高。此外，白血病组中cGVHD患者口腔表征计分与唾液IL-6水平呈正相关关系。
　　结论：口腔cGVHD患者的发病机制可能由Th2、Th17和Treg相关细胞因子即IL-4、IL-6、IL-10、IL-23、TGF-β等介导，其中高水平的IL-23可能是口腔cGVHD患病的危险因素，而TGF-β可能是其保护因素。

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一、前 言

二、材料与方法

1 研究对象

2 研究设计

3 实验仪器与主要试剂

4 实验方法

5 统计学处理

6 质量控制

三、结 果

3.1 研究对象基本情况

3.2 cGVHD患者口腔表征情况

3.3 患者血清T细胞相关细胞因子浓度

3.4 白血病组口腔cGVHD患者与健康对照组血清和唾液T细胞相关细胞因子浓度

3.5 T细胞相关细胞因子,口腔表征计分与VAS计分关联性分析

四、讨 论

1 cGVHD患者口腔临床表征

2T细胞相关细胞因子

3口腔cGVHD与VAS计分及其相关危险因素

4本实验的局限性

五、结 论

参考文献

附录

综述: 口腔慢性移植物抗宿主病的研究进展

病例报告

致谢

攻读学位期间发表的学术论文