基于质谱分析技术的针刺对失眠模型大鼠脑组织蛋白差异表达的研究

摘要

目的：利用蛋白质组学方法，通过生物质谱分析技术鉴定差异蛋白的分子量及蛋白含量，检索Swiss-Port蛋白质数据库，寻找和甄别与失眠相关及针刺治疗失眠疗效相关的差异蛋白，从蛋白质组学角度探讨失眠的病理变化，并为针刺治疗失眠的作用机制提供实验依据。
　　方法：1.选用清洁级雄性 SD大鼠150只随机分为五组：空白对照组、正常捆绑对照组、正常针刺治疗组、模型对照组、模型针刺治疗组。造模方法采用腹腔注射对氯苯丙氨酸混悬液制备大鼠失眠模型。
　　2.失眠模型成功制备后将大鼠断头，取出脑组织，分别提取五组大鼠全脑总蛋白，测定其蛋白浓度；采用双向电泳技术纯化分离出大鼠脑组织内的蛋白质，然后进行考马斯亮兰染色，扫描凝胶图像并获取蛋白质双向凝胶电泳图谱；应用2-DE图谱分析软件“ImageMaster2D Platinum”对双向凝胶电泳图谱进行分析，寻找出五组间差异表达的蛋白质；
　　3.借助Mascot2.2软件检索相应的数据库从中找出差异蛋白表达点，应用基质辅助激光解析电离串联飞行时间质谱（MALDI-TOF/TOF-MS）测肽质量指纹图，检索 Swiss-Port数据库，对差异表达的蛋白质点进行鉴定，得出鉴定的蛋白质结果。
　　结果：1.空白对照组与模型对照组比较：消失的蛋白：14-3-3蛋白、去乙酰化酶沉默信息调节因子；表达下调的蛋白：原肌球蛋白、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶。
　　2.模型针刺治疗组与模型对照组比较：新出现的蛋白：14-3-3蛋白、去乙酰化酶沉默信息调节因子；表达上调的蛋白：原肌球蛋白、微管相关蛋白2激酶、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶。
　　3.空白对照组与正常捆绑对照组比较：消失的蛋白：原肌球蛋白、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶；新出现的蛋白：微管相关蛋白2激酶。
　　4.正常捆绑对照组与模型对照组比较：消失的蛋白：14-3-3蛋白、去乙酰化酶沉默信息调节因子；表达下调的蛋白：微管相关蛋白2激酶。
　　结论：1.应用蛋白质组学技术，发现了与失眠相关的蛋白质，以及与针刺治疗失眠疗效相关的蛋白质。
　　2.利用与失眠相关的蛋白质，有助于进一步研究失眠的疾病标记物和药物靶点；利用与针刺治疗失眠疗效相关的蛋白质，可以进一步探讨针刺治疗失眠的分子生物学机制。

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前言

实验方法

实验一：大鼠失眠模型制备及大鼠脑组织提取

实验二：双向电泳技术

实验三：差异表达蛋白点的质谱鉴定及功能分析

实验结果

1. 大鼠行为学改变

2. 双向凝胶电泳图谱

3. 凝胶图像分析结果

4. 蛋白质的鉴定

理论探讨

1. 祖国医学对失眠的认识

2. 现代医学对失眠的认识

3. 课题立论依据

4. 实验结果分析

结论

致谢

参考文献

附录1 综述

附录2 在校期间论文论著和科研情况

附录3 中英文对照表