PD-1、PD-L1在HCC组织中的表达和HCC组织中CD4+CD25+调节性T淋巴细胞浸润程度及三者与HCC患者预后的相关性研究

摘要

目的:检测PD-1、PD-L1在HCC组织中的表达和HCC组织中CD4+CD25+调节性T淋巴细胞的浸润程度，探讨PD-1、PD-L1和CD4+CD25+调节性T淋巴细胞与HCC患者预后的关系。
　　方法:收集2011年1月至2013年6月在广西医科大学附属肿瘤医院肝胆外科首次行肝切除术治疗的106例HCC患者的冰冻标本组织和196例HCC患者的癌和癌旁病理组织蜡块，通过实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)、蛋白免疫印迹(WB)技术和免疫组化技术，在mRNA和蛋白质水平检测PD-1、PD-L1在HCC组织中的表达和HCC组织中CD4+CD25+调节性T淋巴细胞的浸润程度。收集符合蜡块部分纳入标准的196例HCC患者资料，分析PD-1、PD-L1在HCC组织中的表达水平和HCC组织中CD4+CD25+调节性T淋巴细胞浸润程度与HCC患者预后的关系。
　　结果:qRT-PCR、WB和免疫组化结果显示，癌组织中PD-1、PD-L1的mRNA和蛋白水平均显著高于癌旁组织。PD-1或PD-L1高表达与多个不良临床病理因素有关:如多结节、Edmondson-Steiner分级Ⅲ/Ⅳ级和BCLC C期肿瘤。在总生存率方面，PD-1高表达组患者总生存率显著低于低表达组患者，但两组患者在无瘤生存率方面无统计学差异。PD-L1高表达组患者总生存率显著低于低表达组患者，但两组患者在无瘤生存率方面也无统计学差异。CD4+CD25+调节性T淋巴细胞高表达与多个临床病理因素相关，如与肿瘤大小、肿瘤个数、术前血清白蛋白和Edmondson-Steiner分级Ⅲ/ⅣV级相关。CD4+CD25+调节性T淋巴细胞高浸润组患者与低浸润组患者在总生存率和无瘤生存率方面均无统计学差异。
　　对总样本的多因素分析显示，肿瘤直径≥5cm、多结节、微血管侵犯、包膜不完整、术前甲胎蛋白≥400 ng/ml、术后1月甲胎蛋白≥400 ng/ml、Edmondson-Steiner分级Ⅲ/Ⅳ、BCLC C期肿瘤、肿瘤复发和PD-1、PD-L1、CD4+CD25+调节性T淋巴细胞高表达是患者死亡的独立危险因素。在无瘤生存率方面，肿瘤直径≥5cm、多结节、微血管侵犯、包膜不完整、术前甲胎蛋白≥400 ng/ml、术后1月甲胎蛋白≥400 ng/ml、BCLC C期肿瘤是肿瘤复发的独立危险因素
　　结论:HCC癌组织中PD-1、PD-L1的表达高于癌旁，PD-1、PD-L1在HCC组织中的表达和HCC组织中CD4+CD25+调节性T淋巴细胞的浸润程度与多个临床病理因素相关，是预后不良的风险因素。

目录

声明

个人简历

摘要

前言

1 材料与仪器

1．1 纳入与排除标准

1．2 主要的实验试剂

1．3 主要的实验仪器

1．4 主要试剂溶液的配制

1．5 实验器材的处理

2 实验方法

2．1 实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测癌和癌旁组织中PD-1、PD-L1的表达

2．2 免疫印迹法(Western Blotting)检测PD-1和PD-L1蛋白的表达

2．3 免疫组化检测癌和癌旁组织中PD-1、PD-L1的表达和CD4+CD25+调节性T淋巴细胞的浸润程度

2．4 治疗、随访与观察指标

2．5 统计学方法

3 结果

3．1 病例纳入情况

3．2 总纳入病例一般特点和预后分析

3．3 PD-1和PD-L1在癌和癌旁组织的表达

3．4 PD-1和PD-L1的表达与临床病理因素以及患者预后的关系

3．5 免疫组化检测CD4+CD25+调节性T淋巴细胞在癌和癌旁组织的浸润

3．6 CD4+CD25+调节性T淋巴细胞在HCC癌和癌旁组织的浸润与临床病理因素以及患者预后的关系

3．7 多因素分析预后风险因素

3．8 PD-1、PD-L1的表达水平和CD4+CD25+调节性T淋巴细胞浸润程度的内部相关性

4 讨论

5 结论

参考文献

综述 PD-1／PD-L1抑制剂在抗肿瘤免疫治疗中的研究进展

致谢

攻读硕士学位期间发表的学术论文