负性协同刺激分子在手足口病外周血T细胞、NK细胞上表达研究

摘要

目的:研究手足口病(Hand，foot，and mouth disease，HFMD)患儿外周血T细胞亚群、NK细胞表达情况以及负性协同刺激分子:程序性死亡因子-1(programmed cell death-1，PD-1)、T细胞免疫球蛋白粘蛋白分子-3(T cellimmunoglobulin domain and mucindomainprotein-3，Tim-3)、淋巴细胞活化基因分子-3(Lymphocyte activation gene-3，LAG-3)、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4（Cytotoxic T lymphocyte assoiated antigen-4，CTLA-4）在CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞、CD3-CD16+CD56+细胞表面的表达水平，探讨负性协同刺激分子在HFMD免疫应答中的作用，为HFMD的发病机制研究提供新思路。
　　方法:收集2016年1月至2016年12月在广西地区临床诊断为HFMD病例64例，依据病情严重程度分为:危重症组36例、重症组14例，轻症组14例，同时收集健康儿童15例作为正常对照组。采用逆转录聚合酶链式反应（Reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR）检测64例HFMD标本病原学，用酶联免疫吸附法(enzyme linked immuno-sorbentassay，ELISA)检测正常对照组柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16，CVA16)和肠道病毒71型(Enterovirus71，EV71)的IgM抗体;流式细胞术检测以上79例标本外周血T细胞亚群、NK细胞比例;同时流式细胞术检测负性协同刺激分子PD-1、Tim-3、LAG-3、CTLA-4在在CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞、CD3-CD16+CD56+细胞表面的表达水平。最后统计和分析各组间的在病原学、T细胞亚群、NK细胞比例以及负性协同刺激分子表达水平的差异和相关性。
　　结果:危重症组EV71-RNA阳性率明显高于重症组和轻症组(P＜0.05)，危重症组、重症组EV71-RNA阴性率占54％(27/50)，3例死亡病人中1例为EV71-RNA阳性。64例HFMD病例外周血CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞、NK细胞比例显著低于正常对照组，其中危重症组比例最低(P＜0.05)。64例HFMD病例中EV71-RNA阳性和EV71-RNA阴性两组间T细胞亚群及NK细胞百分比表达无显著差异(P＞0.05)。危重症组CD4+T细胞、CD8+T淋巴细胞、CD3-CD16+CD56+细胞表面上负性协同刺激分子PD-1表达水平显著高于轻症组和正常对照组(P＜0.05)。64例HFMD病例中EV71-RNA阳性与EV71-RNA阴性两组病例中CD4+T细胞、CD8+T淋巴细胞、CD3-CD16+CD56+细胞表面PD-1百分比表达无显著差异(P＞0.05)，但在数值上EV71-RNA阳性组更高。64例HFMD病例中CD4+T细胞、CD3-CD16+CD56+细胞百分比与PD-1表达水平呈显著负相关(P＜0.05)。危重症组、重症组、轻症组、正常对照组4组间CD4+T细胞、CD8+T淋巴细胞、CD3-CD16+CD56+细胞表面上负性协同刺激分子Tim-3、LAG-3、CTLA-4表达水平无显著差异(P＞0.05)。
　　结论:EV71是引起危重症HFMD最主要的病原体，但仍要重视其他肠道病毒感染引起危重症HFMD。HFMD患儿存在T淋巴细胞、NK细胞免疫功能紊乱。危重症HFMD患儿存在T淋巴细胞、NK细胞功能耗竭/功能障碍。HFMD患儿外周血负性协同刺激分子PD-1表达水平与CD4+T细胞、NK细胞百分比呈负相关，高表达的PD-1可能抑制T淋巴细胞、NK免疫功能，参与危重症HFMD发病过程。

目录

声明

个人简历

摘要

前言

1 材料

2 方法

3．2 病原学检测结果

3．3 病例组各组间以及与正常对照组之间T细胞亚群及NK细胞检测结果

3．4 危重症组、重症组、轻症组、对照组问T细胞亚群及NK细胞检测结果

3．5 EV71-RNA阳性和EV71-RNA阴性2组间T细胞亚群及NK细胞检测结果

3．6 PD-1在CD4+T细胞、CD8+T细胞、NK细胞上表达

3．7 EV71-RNA阳性与EV71-RNA阴性病例中PD-1百分比表达结果分析

3．8 PD-1表达水平与在CD4+T细胞、CD8+T细胞、NK细胞百分比相关性分析

3．9 3例死亡病例临床资料和实验结果

3．10 Tim-3在CD4+T细胞：CD8+T细胞、NK细胞上表达

3．12 CTLA-4在CD4+T细胞、CD8+T细胞、NK细胞上表达

讨论

1．HFMD病原学和年龄构成

2．HFMD外周血T细胞亚群、NK细胞表达特征

3．负性协同刺激分子PD-1、Tim-3、LAG-3、CTLA-4在手足口病T细胞、NK细胞上的表达

结论

参考文献

英汉缩略词对照表

文献综述 肠道病毒EV71感染手足口病的研究概述

致谢

攻读硕士学位期间论文发表情况