益肾化瘀方对肾间质纤维化大鼠肾组织MMP-1mRNA、TIMP-1mRNA表达的影响

摘要

目的：通过建立肾间质纤维化(renal interstitial fibrosis,RIF)大鼠单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)模型，动态观察UUO大鼠肾功能，肾组织病理改变和肾组织羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)含量、血小板源性生长因子BB(platelet derived growth factor BB,PDGF-BB)以及基质金属蛋白酶-1(matrix metalloproteinase-1,MMP-1)mRNA、金属蛋白酶组织抑制因子-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)mRNA的表达变化及益肾化瘀方(YiShenHuaYu Recipe，YSHYR)对以上观察指标的影响，探讨益肾化瘀方拮抗肾间质纤维化的可能作用机制。
　　方法：将162只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、缬沙坦治疗组、益肾化瘀方高剂量治疗组（简称益高组）、益肾化瘀方中剂量治疗组（简称益中组）、益肾化瘀方低剂量治疗组（简称益低组）。每组27只。各组选用单侧输尿管结扎法对大鼠行UUO术，其中假手术组只将左侧输尿管进行分离但不给予结扎。术后次日起对每组大鼠各自给药，其中假手术组和模型组每天按20mL/Kg予0.9％生理盐水灌胃,益肾化瘀方高、中、低剂量组分别给予32g/Kg·d、16g/Kg·d、8g/Kg·d中药灌胃,缬沙坦组予以缬沙坦胶囊溶解稀释液13.3mg/Kg·d，各组给药体积都为20mL/Kg·d。于UUO术后第7、14、28天分批处死大鼠，留取标本。腹主动脉采血检测肾功能；以HE和Masson法染色，于光镜下观察UUO模型大鼠肾组织病理学变化，并进行肾间质纤维化评分；选择碱性水解法检测肾组织Hyp含量；选取ELISA法检测肾组织PDGF-BB的表达变化；采取实时荧光定量PCR法检测肾组织MMP-1mRNA、TIMP-1mRNA的表达。
　　结果：1.益肾化瘀方对各组大鼠血清BUN、Scr、CysC的影响
　　假手术组大鼠不同时间点血清 BUN、Scr、CysC含量无明显改变；与假手术组相比，模型组及各给药组大鼠血清 BUN、Scr、CysC含量同一时间点各有不同程度的增加（P<0.05或 P<0.01），并随时间的延长逐渐增加；与模型组相比，各给药组大鼠血清BUN、Scr、CysC同一时间点均有不同程度的降低（P<0.05或 P<0.01），其中益高组及缬沙坦组降低最为明显，二者组间未见统计学差别（P>0.05）。
　　2.益肾化瘀方对各组大鼠肾脏病理形态学变化的影响
　　HE染色和Masson染色光镜下观察，在各时间点内假手术组大鼠肾组织结构未见明显变化；模型组大鼠肾组织病理形态变化最为严重，其主要表现为肾小管的扩张、萎缩、消失，间质炎性细胞浸润及纤维化，并随时间的延长病变呈进行性加重；与模型组相比，各治疗组大鼠肾组织病理改变在同一时间点均有不同程度的减轻，且益高组及缬沙坦治疗组病理改变最轻。
　　3.益肾化瘀方对各组大鼠肾组织Hyp含量表达的影响
　　假手术组大鼠在同期肾组织内 Hyp的含量无明显改变；与假手术组相比，模型组及各给药组大鼠肾组织中Hyp含量表现为不同程度的增多（P<0.01），并随时间的延长逐步上升，其中模型组升高最为明显。与模型组相比，各给药组大鼠肾组织Hyp含量下降，其中益高组和缬沙坦治疗组下降最为明显（P<0.01），两者组间未见统计学差别（P>0.05）。
　　4.益肾化瘀方对各组大鼠肾组织PDGF-BB表达的影响
　　假手术组大鼠肾组织内PDGF-BB含量在各时期均无明显改变；与假手术组相比，模型组及各给药组大鼠肾组织内 PDGF-BB含量均呈不同程度的升高（P<0.01），且随时间的延长而增加。与模型组相比，各给药组含量表现不同程度降低，其中益高组及缬沙坦治疗组降低最明显（P<0.01），二组间差异不显著（P>0.05）。
　　5.益肾化瘀方对各组大鼠肾组织MMP-1mRNA、TIMP-1mRNA表达的影响
　　与假手术组相比，模型组及各给药组中MMP-1mRNA、TIMP-1mRNA的表达均表现为不同程度的增高，且表达随时间延长持续增加，同时同一时间点内TIMP-1mRNA表达增加明显高于MMP-1mRNA的表达增加。与模型组相比，各给药组大鼠肾组织MMP-1mRNA的表达未见明显差异（P>0.05），TIMP-1mRNA表达较之有不同程度的下降，其中益高组与缬沙坦组显著降低（P<0.05或P<0.01）,二者组间未见统计学差别（P>0.05）。
　　结论：1.益肾化瘀方可降低UUO大鼠血清BUN、Scr、CysC水平，改善肾功能，减轻肾组织病理学损伤。
　　2.益肾化瘀方可通过降低肾组织Hyp含量，抑制PDGF-BB的表达，减轻肾间质纤维化程度。
　　3.益肾化瘀方可能通过调节 UUO大鼠肾组织中MMP-1mRNA、TIMP-1mRNA的表达，纠正MMP-1/TIMP-1体系的失衡，促进肾组织ECM的降解，而发挥肾脏保护作用。

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中英文缩略词对照

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前言

材料与方法

1 实验材料

2 实验方法

3 统计学处理

结果

1 各组大鼠一般情况

2 各组大鼠肾脏外观

3 各组大鼠不同时间点肾功能的检测

4 各组大鼠肾脏病理观察结果

5 各组大鼠不同时间点肾组织Hyp含量测定结果

6 各组大鼠不同时间点肾组织PDGF-BB表达结果

7 各组大鼠不同时间点肾组织MMP-1mRNA、TIMP-1mRNA表达结果

讨论

1 动物模型的选择

2 肾间质纤维化的发生机制

3 西医对肾间质纤维化的治疗现状

4 中医对肾间质纤维化的认识及防治研究

5 益肾化瘀方对肾间质纤维化的干预效应

6 思考与展望

结论

致谢

参考文献

附录1 病理图片

附录2 文献综述: 基质金属蛋白酶及其抑制剂与肾间质纤维化

附录3 在校期间论文论著和科研情况