β肾上腺素能受体在人舌鳞癌细胞系CAL-27中的表达及β阻滞剂对其增殖迁移侵袭的作用

摘要

目的:研究β受体在人舌鳞癌细胞系CAL-27的表达以及β-AR阻滞剂对CAL-27增殖、迁移侵袭的作用。
　　方法:应用消化法进行正常口腔黏膜上皮细胞（分别来源于唇、腭、牙龈黏膜）原代培养及免疫荧光法鉴定。运用免疫组织化学法及qRT-PCR法检测CAL-27及正常口腔黏膜上皮细胞β-AR的表达，CCK-8法检测不同浓度的普萘洛尔及美托洛尔对CAL-27细胞增殖影响，细胞划痕实验检测不同浓度的普萘洛尔及美托洛尔对细胞的迁移影响，以及Transwell实验检测不同浓度的普萘洛尔及美托洛尔对CAL-27细胞侵袭影响。
　　结果:免疫组化法提示了CAL-27β1-AR、β2-AR的表达量均高于正常口腔黏膜上皮细胞组(P＜0.05)，qRT-PCR显示了β2-AR的mRNA表达量低于口腔黏膜上皮细胞组，而β1-AR的mRNA表达量均高于正常上皮细胞组;CCK-8的结果显示当药物浓度＞50μM时，普萘洛尔抑制细胞增殖活力的效果更好(F=19.550，P＜0.05);两种药物均随浓度升高对CAL-27细胞增殖活力的抑制增强（趋势P＜0.05）;细胞划痕实验结果示当药物浓度为2.5μM/L及以上时，两种药物对CAL-27细胞迁移抑制作用与0μM/L比较，差异均有统计学意义(F=7.83，P＜0.05)，普萘洛尔对CAL-27细胞迁移抑制更强。两种药物均随浓度升高对CAL-27细胞迁移的抑制作用增强，趋势P＜0.05;Transwell实验结果示当药物浓度为1.0μM及以上时，两种药物对CAL-27细胞侵袭抑制作用与0μM/L比较，差异均有统计学意义(F=16.11，P＜0.05)，普萘洛尔对CAL-27细胞迁移抑制更强。两种药物均随浓度升高对CAL-27细胞侵袭抑制作用增强，趋势P＜0.05。
　　结论:细胞系CAL-27β1-AR的表达高于正常口腔黏膜上皮细胞，而β2-AR的表达低于正常口腔黏膜上皮细胞;低浓度普萘洛尔及美托洛尔对CAL-27细胞的增殖无明显调节作用，但能抑制CAL-27迁移和侵袭能力。

目录

声明

个人简历

中英文缩略词表

摘要

前言

1．实验材料及仪器

1．1 正常人口腔黏膜组织来源

1．2 CAL-27细胞系

1．3 主要试剂及耗材

1．4 设备及仪器

2．实验方法

2．2 口腔黏膜上皮细胞传代

2．3 口腔黏膜上皮细胞鉴定

2．4 CAL-27细胞培养

2．5 细胞冻存

2．6 细胞复苏

2．7 检测β1，β2受体在正常黏膜细胞与CAL-27的表达

2．8 CCK-8法检测CAL-27细胞增殖的情况

2．9 细胞划痕检测CAL-27细胞迁移的情况

2．10 Transwell检测CAL-27细胞侵袭的情况

2．11 统计学处理

3．实验结果

3．1 口腔黏膜上皮细胞培养及鉴定

3．2 CAL-27细胞形态观察

3．4 qRT-PCR检测β-AR的表达

3．5 CCK-8法检测细胞增殖情况

3．6 细胞划痕法检测细胞迁移情况

3．7 Transwell法检测细胞的侵袭情况

4．讨论

5．结论

参考文献

综述

致谢