广西肝癌高发区肝癌患者细胞中HBV X基因的整合位点及靶基因分析

摘要

目的：探讨乙肝病毒X基因在原发性肝癌细胞染色体的整合规律及其在肝癌发生中的作用。
　　方法：应用重复序列-多聚酶链反应(Alu-PCR)的方法扩增30例乙肝病毒相关肝癌组织和配对癌旁组织中整合的HBV X片段，将Alu-PCR纯化后的产物进行测序。测序结果经NCBI BLAST和Map Viewer进行比对，确定HBVX基因整合在人类染色体上的位置和对应的靶基因。
　　结果：(1)30例肝癌病例中，17例(56.67％)肝癌组织检测到HBV X基因整合，有2例为正向插入，12例为反向插入，3例同时有正、反向插入宿主基因;26例(86.67％)癌旁组织检测到HBVX基因整合，7例为正向插入，7例为反向插入，12例同时有正、反向插入宿主基因;癌组织和癌旁组织两组间HBV整合率差异有统计学意义(P＜0.05)。
　　(2)30例肝癌病例中，癌组织定位的11个整合位点对应的基因有8个，分别是P73、TGFRBR2、hTERT、HRAS、HNF1A、P53、TTR、BSG、MLL4;癌旁组织定位的27个整合位点对应的基因有17个，分别是P73、IL10、IRS1、MSH2、hTERT、CDKN1A、KDM4C、IL2RA、HRAS、HNF1A、EDNRB、MAPK3、IL4R、CEPT、TTR、BSG、EP300。
　　研究对象的性别、年龄、HBeAg、HBV DNA、ALT、AST与HBV X基因整合无明显的关系。(P＞0.05)
　　结论：HBV X基因在肝癌细胞染色体上的整合呈不均衡分布，P73、hTERT、HRAS3个基因是广西肝癌高发区常见的整合基因，整合基因与HBV相关性肝癌的发生密切相关。

目录

声明

摘要

前言

1 对象与方法

1．1 研究对象

1．2 实验主要仪器及试剂

1．2．1 主要仪器

1．2．2 主要试剂

1．3 实验方法

1．3．1 血清HBVDNA的测定

1．3．2 血清HBeAg检测

1．3．3 血清ALT检测

1．3．4 血清AST检测

1．3．5 组织ILBVDNA的提取

1．3．6 组织Alu-PCR扩增

1．3．7 琼脂糖凝胶电泳

1．3．8 纯化HBV-Alu-PCR产物

1．3．9 测序

1．4 HBVX整合位点及靶基因的确定

1．5 统计学分析

2 结果

2．1 HBV X基因整合片段的扩增

2．2 HBV X基因整合率

2．3 HBV X基因在人类染色体上的整合位点及整合靶基因

2．4 HBV X基因整合与HCC患者临床参数之间的关系

3 讨论

四 研究结论

参考文献

附录

文献综述

致谢

攻读学位期间发表的学术论文