青钱柳双瓜袋泡茶对2型糖尿病大鼠降糖降脂作用及其机制研究

摘要

目的:
　　观察青钱柳双瓜袋泡茶(QSG)对高脂高糖饮食（HFD）联合链脲佐菌素(STZ)诱导2型糖尿病大鼠的降糖降脂作用及其机制。
　　方法:
　　80只雄性SD大鼠，取10只纳入正常组，喂予正常标准颗粒饲料，其余大鼠喂予HFD，共饲喂75天。Day42，除正常组大鼠外，其余大鼠腹腔注射STZ(35mg·kg-1)诱导2型糖尿病模型。5天后，禁食不禁水14～16h后，使用罗氏血糖仪检测空腹血糖(FBG)。选取FBG11.0-28.0mmol·L-1之间的大鼠50只，在按体重随机分为5组:模型组，二甲双胍组(268mg·kg-1)和QSG三个剂量组(1575，3150，6300mg·kg-1)。正常组和模型组大鼠灌胃给予纯净水(10ml·kg-1)，二甲双胍组和QSG剂量组给予相应浓度的二甲双胍或QSG药液(10ml·kg-1)，每天1次，连续给药28天。
　　每日观察项目有每只大鼠一般临床症状、摄食量、饮水量和排尿量，每周称量大鼠体重和检测FBG各1次，并记录。Day75，禁食不禁水14～16h后，进行空服糖耐量实验(OGTT)，使用罗氏血糖仪检测血糖值的变化。OGTT实验后，腹主动脉采取血样，之后，处死大鼠，进行胰腺和肝脏取材。
　　使用生化检测谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、尿素氮（BUN）、肌酐（CREA）、甘油三脂(TG)、胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDLC)、高密度脂蛋白(HDLC)水平。使用ELISA法检测空腹血清胰岛素(FINS)、血浆抵抗素(Resistin)、瘦素(LEP)、脂联素（ADPN）水平，并计算稳态胰岛抵抗指数(HOMA-IR)、胰岛素敏感指数(ISI)、稳态胰岛β细胞功能指数(HBCI)。使用酶标法检测肝脏超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和血清谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)水平;使用紫外分光法检测血清游离脂肪酸(FFA)和过氧化氢酶(CAT)水平。
　　使用RT-PCR检测肝组织PI3K/Akt信号转导通路的相关因子IRS2、PI3K p85、Akt2、AMPKα2mRNA的表达水平;使用Western Blot检测肝组织IRS2、PI3K p85、p-Akt、Akt、AMPKα的表达水平。
　　胰腺和肝脏组织病理结构改变采用苏木素-伊红染色(HE)并光镜下检查。
　　结果:
　　QSG对HFD联合STZ诱导2型糖尿病大鼠一般临床症状的影响，与正常组比较，模型组大鼠摄食量、饮水量、排尿量明显增加，体重显著减少(P＜0.05)，符合2型糖尿病的“三多一少”典型特征。与模型组比较，QSG组大鼠摄食量、饮水量、排尿量明显改善，体重显著增加(P＜0.05)，说明2型糖尿病大鼠的“三多一少”症状明显改善。
　　QSG对HFD联合STZ诱导2型糖尿病大鼠血糖的影响，与正常组比较，模型组大鼠FBG、FINS、HOMA-IR、OCTT和AUC等指标显著增加(P＜0.05)，ISI和HBCI显著降低(P＜0.05);与模型组比较，QSG组大鼠FBG、FINS、HOMA-IR、OCTT和AUC等指标显著降低(P＜0.05)，ISI显著升高(P＜0.05)，但HBCI差异不具显著性(P＞0.05）。说明QSG具有降血糖作用，增加胰岛素敏感性。
　　QSG对HFD联合STZ诱导2型糖尿病大鼠肝肾功能指标的影响，与正常组比较，模型组大鼠AST、ALT、BUN和CREA等指标显著增加(P＜0.05);与模型组比较，QSG组大鼠AST、ALT、BUN和CREA等指标显著降低(P＜0.05)。说明QSG可以改善肝肾功能，而用药安全。
　　QSG对HFD联合STZ诱导2型糖尿病大鼠血脂的影响，与正常组比较，模型组大鼠TG、TC、LDLC、FFA、Resistin和LEP等指标显著增加(P＜0.05)，HDLC和ADPN显著降低(P＜0.05);与模型组比较，QSG组大鼠TG、TC、LDLC、FFA、Resistin和LEP等指标显著降低(P＜0.05)，HDLC显著升高(P＜0.05)，但ADPN差异不具显著性(P＞0.05）。说明QSG有降血脂、调节脂质代谢紊乱。
　　QSG对HFD联合STZ诱导2型糖尿病大鼠抗氧化应激的影响，与正常组比较，模型组大鼠CAT、GSH-Px和SOD等指标显著降低(P＜0.05)，MDA显著升高(P＜0.05);与模型组比较，QSG组大鼠CAT、GSH-Px和SOD等指标显著升高(P＜0.05)，MDA显著降低(P＜0.05)。说明QSG具有改善其抗氧化能力。
　　QSG对HFD联合STZ诱导2型糖尿病大鼠mRNA和蛋白表达的影响，与模型组比较，QSG组大鼠IRS2、PI3K p85、Akt2和AMPKα2等mRNA表达显著降低(P＜0.05)。与正常组比较，模型组大鼠IRS2、PI3K p85、p-Akt、Akt和AMPKα等蛋白表达显著降低(P＜0.05);与模型组比较，QSG组大鼠IRS2、PI3K p85、p-Akt、Akt和AMPKα等蛋白显著升高(P＜0.05)。说明QSG可能是通过激活PI3K/Akt信号通路的相关因子起到降脂降糖作用。
　　QSG对HFD联合STZ诱导2型糖尿病大鼠胰腺和肝脏组织结构的影响，与正常组比较，模型组大鼠胰腺和肝脏组织结构发生了病理性损伤;与模型组比较，QSG组大鼠的胰腺和肝脏组织结构的损伤得到明显缓解。说明QSG对胰腺和肝脏组织有保护作用。
　　结论:
　　以上数据表明QSG可以调节2型糖尿病大鼠体重和血糖水平，改善IR，有良好降血糖的效果，且对肝肾功能起到改善作用，以及对胰岛细胞和肝脏细胞的损伤有保护作用。QSG可降低血脂，调节血浆脂肪因子，纠正脂质代谢，可有效缓解2型糖尿病大鼠的氧化损伤，改善其抗氧化能力，减少氧化反应对其生物体的损伤。QSG调节IR可能是通过上调IRS2、PI3Kp85、Akt2、AMPK mRNA表达水平和上调IRS2、PI3K p85、p-Akt、Akt、AMPKα蛋白表达量，可能是QSG治疗糖尿病调节糖脂代谢的机制之一，这表明QSG可能是用于治疗2型糖尿病的天然产物和潜在的治疗剂。

目录

声明

个人简历

主要英文缩略词表

摘要

前言

第一章 QSG对2型糖尿病模型大鼠降血糖的作用

1 实验材料

2 实验方法

3 实验结果

3．1 一般状态观察

3．2 QSG对2型糖尿病大鼠体重的影响

3．3 QSG对2型糖尿病大鼠FBG的影响

3．4 QSG对大鼠FINS、HOMA-IR、ISI、HBCI的影响

3．5 QSG对2型糖尿病大鼠OGTT的影响

3．6 QSG对2型糖尿病大鼠肝肾功能的影响

3．7 QSG对2型糖尿病大鼠胰腺组织形态的影响

3．8 QSG对2型糖尿病肝脏组织形态的影响

4 讨论

4．1 HFD联合STZ诱导2型糖尿病模型

4．2 QSG对2型糖尿病大鼠一般状态和体重的影响

4．4 QSG对2型糖尿病大鼠FINS的影响

4．5 QSG对2型糖尿病大鼠OGTT的影响

4．6 QSG对2型糖尿病大鼠胰腺病理形态的影响

4．7 QSG对2型糖尿病大鼠肝肾功能以及肝脏病理形态的影响

5 小结

第二章 QSG对2型糖尿病大鼠降血脂和抗氧化应激的影响

1 实验材料

2 实验方法

3 实验结果

3．1 QSG对2型糖尿病大鼠血脂的影响

3．2 QSG对2型糖尿病大鼠血浆脂肪因子的影响

3．3 QSG对2型糖尿病大鼠抗氧化应激的影响

4 讨论

4．2 QSG对2型糖尿病大鼠脂肪因子的影响

4．3 QSG对2型糖尿病大鼠抗氧化应激的影响

四 小结

第三章 QSG对2型糖尿病大鼠PI3K/Akt信号转导通路的研究

1 实验材料

2 实验方法

3 实验结果

3．1 QSG对2型糖尿病大鼠PI3K/Akt信号转导通路中相关因子mRNA表达的影响

3．2 QSG对2型糖尿病大鼠PI3K/Akt信号转导通路中相关因子蛋白表达的影响

4 讨论

4．2 QSG对2型糖尿病大鼠的IRS的影响

4．3 QSG对2型糖尿病大鼠的PI3K的影响

4．4 QSG对2型糖尿病大鼠的Akt的影响

4．5 QSG对2型糖尿病大鼠的AMPK的影响

5 小结

参考文献

结语

综述

致谢

攻读学位期间发表的学术论文