温通法对S180荷瘤小鼠抗肿瘤作用的免疫机理研究

摘要

目的：研究温通法对S180荷瘤小鼠的抗肿瘤作用及其与调节荷瘤小鼠免疫功能的关系，探讨其抗肿瘤作用的免疫学机理。
　　方法：将72只健康昆明种SPF级小白鼠给予普通SPF级饲料适应性喂养7天后，按照随机数字表法进行分组，分为空白对照组、荷瘤对照组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组（经口灌胃温通法中药自制煎剂，中药低剂量组灌服相当于中药生药材1.30g/ml的药液，中药中剂量组灌服相当于中药生药材2.56g/ml的药液，中药高剂量组灌服相当于中药生药材3.83g/ml的药液）、环磷酰胺注射液腹腔注射组，共计6组，每组12只。空白对照组与荷瘤对照组，均于造模次日同时给予生理盐水灌胃，0.2ml/只，每日1次；其中中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组：均于造模次日开始给予相应浓度的中药自制煎剂灌胃，0.2ml/只，每日1次；环磷酰胺腹腔注射组：于造模后72h，使用浓度2mg/ml的环磷酰胺注射液，腹腔注射0.3ml/只，隔日1次。以上各组均给药至造模后第12天。末次给药后次日，取实验所需标本，测定各治疗组荷瘤小鼠瘤体质量变化、抑瘤率（IR）和各组的胸腺指数变化；采用改良四甲基偶氮唑蓝（M T T）比色法测定自然杀伤细胞（NKcell）的杀伤活性；采用流式细胞仪（FACS）法测定小鼠外周血中T淋巴细胞CD4+细胞亚群、CD8+细胞亚群及CD4+/CD8+的比值变化；应用双抗体夹心酶联免疫吸附分析（ABC-ELISA）法检测外周血清中干扰素-γ（IFN-γ）、白介素-2（IL-2）浓度的变化。
　　结果：
　　（1）瘤体质量与抑瘤率实验中，中药低、中、高剂量组、环磷酰胺腹腔注射组与荷瘤对照组相比，瘤体质量明显降低，差异均有统计学意义（P<0.05）；中药低、高剂量组瘤体质量与CTX腹腔注射组相比，差异有统计学意义（P<0.05）。抑瘤率方面，中药低、高剂量组与 CTX腹腔注射组相比，差异有统计学意义（P<0.05）。
　　（2）胸腺指数实验中，荷瘤对照组、中药低、中、高剂量组、CTX腹腔注射组的胸腺指数与空白对照组相比，均明显降低，差异有统计学意义（P<0.05）；与荷瘤组相比，中药低、中、高剂量组胸腺指数均明显升高，差异有统计学意义（P<0.05）；中药中剂量组与低、高剂量组、CTX腹腔注射组相比，差异有统计学意义（P<0.05）。
　　（3）脾脏自然杀伤细胞的杀伤活性实验中，中药中、高剂量组与荷瘤对照组相比较，差异有统计学意义（P<0.05），中药中剂量组 NK细胞杀伤活性与中药低、高剂量组相比，差异有统计学意义（P<0.05）；中药中剂量组与CTX腹腔注射组相比，差异有统计学意义（P<0.05）。
　　（4）外周血清T淋巴细胞亚群测定实验中，荷瘤对照组、中药低、高剂量组、CTX腹腔注射组小鼠的CD4+/CD8+比值，与空白对照组相比，差异有统计学意义（P<0.05）；与 CTX腹腔注射组相比，中药低、中、高剂量组 CD4+细胞亚群的升高、CD8+细胞亚群的下降，差异有统计学意义（P<0.05）。
　　（5）与荷瘤对照组相比，中药低、中、高剂量组小鼠外周血清 IFN-γ含量均明显升高，差异统计学意义（P<0.05），而环磷酰胺组 IFN-γ含量显著低于荷瘤对照组（P<0.05）。与CTX腹腔注射组相比，中药低、中、高剂量组小鼠外周血IFN-γ含量都显著高出于前者的水平，差异有统计学意义（P<0.05）。中药中、高剂量组与荷瘤对照组相比，外周血 IL-2含量均明显升高，差异有统计学意义（P<0.05）。
　　结论：
　　（1）温通法能提高荷瘤小鼠的胸腺指数，在一定程度上能够提高中枢性免疫器官-胸腺的免疫功能；温通法中药中剂量组抑瘤效果最佳。
　　（2）温通法可能是通过提高荷瘤小鼠脾 NK细胞的杀伤活性，从而发挥其杀伤肿瘤细胞的功能。
　　（3）温通法可能是通过上调CD4+细胞亚群，下调CD8+细胞亚群，以及改善CD4+/CD8+细胞亚群比值失衡状态，从而起到调节细胞免疫功能状态的作用，使机体的免疫调节功能得到进一步改善，最终起到抗肿瘤的作用。
　　（4）温通法可能是通过增加细胞因子 IL-2、IFN-γ的分泌，从而发挥抑制肿瘤细胞增殖的作用。
　　（5）温通法发挥抗肿瘤的免疫效应的剂量以中剂量组效果最佳。

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声明

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中文摘要

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前言

材料与方法

1 实验瘤株与模型简介

2 实验方法

3 统计学处理

结果与分析

1 温通法对 S180 荷瘤小鼠免疫器官-胸腺指数、瘤体质量及抑瘤率的影响

2 温通法中药对脾NK细胞活性的影响

3 温通法对S180荷瘤小鼠外周血T淋巴细胞CD4+和CD8+细胞亚群及其比值的影响

4 温通法对S180荷瘤小鼠外周血IL-2水平的影响

5 温通法对S180荷瘤小鼠外周血IFN-γ水平的影响

理论探讨

1 祖国医学对恶性肿瘤及其治疗的认识

2 中医医家对温通法治疗恶性肿瘤的认识和临床应用

3 中医药抗肿瘤与免疫调节的临床应用及研究

4 中医药抗肿瘤与免疫调节功能的现代实验研究

5 现代医学关于肿瘤与免疫的研究进展

6 导师经验

7 实验组方分析

结论

展望

参考文献

致谢

附录1 （文献综述）:中医药抗恶性肿瘤的免疫机理研究进展

附录2

附录3 缩略语表