胎羊体外循环中胎羊心肌IL-6，IL-10，TNF-a变化及相关性研究

摘要

目的：
　　通过建立胎羊体外循环模型观察胎羊血气变化以及胎羊体外循环围术期胎羊心肌中IL-6，IL-10，TNF-a的表达变化，并探讨它们在胎羊体外循环后对胎羊心功能影响的机制。
　　方法：
　　孕羊（孕120-140天）8只，随机将其分为对照组与转流组，每组4只。对照组孕羊下腹部正中切口，暴露子宫，然后将子宫切开，使胎羊暴露，切开胎羊一侧上肢，腋动脉置入套管针，检测血流动力的变化和采集血液样本。胎羊正中开胸，主肺动脉和右心房插管，利用离心泵和胎盘（作为唯一氧合器）建立体外循环，不转流，观察3h。转流组孕羊的处理与对照组相同。转流组CPB1h，停机后观察2h，分别记录CPB前(T0)、CPB30min(T1)、CPB1h(T2)、CPB结束后1h(T3)、CPB结束后2h(T4)胎羊平均动脉压、心率和腋动脉血气结果。分别取对照组和转流组胎羊体外循环转流前和停机2h后的胎羊心脏心室面约0.5×0.5×0.5cm大小的胎盘组织。采用酶联免疫吸附试验方法(ELISA)测定血清IL-6，IL-10，TNF-a的浓度。石蜡免疫组织化学法检测各组胎羊心肌组织中IL-6，IL-10，TNF-α表达水平，并利用Image-Pro Plus6.O(IPP)彩色图像分析系统对胎羊心肌中IL-6，IL-10，TNF-α的表达情况进行半定量分析。
　　结果：
　　1.整个实验过程中对照组和转流组胎羊心率、血压和动脉血气值均有变化，组内比较无统计学意义(p＞0.05)，组间比较有统计学意义(P＜O.05)。转流组胎羊心率（HR）和动脉平均压(MAP)先升后降再升，而动脉血氧分压(PaO2)先下降后上升，但均无统计学意义(P＞0.05)。转流组动脉二氧化碳分压(PaCO2)和动脉血乳酸盐(Lactate)有明显上升后下降的趋势，胎羊动脉PH有明显先下降后上升的趋势，变化有统计学意义。体外循环过程中实验组和转流组胎羊动脉PH随时间逐渐下降趋势，CPB停止后1h到达最低值后又上升，但对照组和转流组下降和上升的幅度不同，转流组变化幅度更大。对照组和转流组胎羊动脉(Pa CO2)随着实验的进行先上升后下降，CPB停止后1h到达最高值后开始下降，对照组和转流组上升和下降的幅度不同，转流组变化更显著。对照组和转流组胎羊动脉血乳酸盐(Lactate)也随着实验的进行逐渐上升然后下降，CPB停止后1h达到最高峰然后下降，且转流组变化幅度更大。
　　2.不同时相血清IL-6，TNF-a的比较，转流组在CPB开始后IL-6，TNF-a水平均较CPB前(T0)升高(P＜0.05)。T0时，对照组与转流组间IL-6，TNF-a水平无统计学意义(P＞0.05);在T1-T4时，转流组IL-6，TNF-a水平明显高于对照组(P＜0.05)，转流组IL-6，TNF-a先上升，在CPB结束后1h达到峰值后下降。不同时相血清IL-10的比较，转流组在CPB开始后IL-10水平均较CPB前(T0)升高(P＜0.05)。T0时，对照组与转流组间IL-10水平无统计学意义(P＞0.05);在T1-T4时，转流组IL-10水平明显高于对照组(P＜0.05)，转流组IL-10随时间上升。
　　3.对照组胎羊心肌组织IL-6，TNF-a呈低表达。在转流组中的表达明显高于对照组(P＜0.05)，IL-6，TNF-a的表达主要分布于心肌细胞、间质成纤维细胞的细胞膜和细胞浆表现为棕黄色或黄色颗粒。而IL-10在胎羊心肌组织中呈低表达或无表达。
　　结论：
　　胎羊体外循环模型的建立对胎羊心功能有明显的影响，我们推测异常升高的炎症因子是胎羊心肌损伤的主因。此模型可为将来胎儿体外循环技术向临床应用转化提供一定的实验基础。胎羊体外循环后胎羊心肌组织中IL-6，TNF-a表达增强而血清中含量明显增加，IL-10在心肌组织中无明显表达而血清含量却显著升高，我们推测IL-6，TNF-a主要在心肌增强表达而IL-10主要在心肌以外的组织或器官高表达，三种炎症因子均可能参与了胎羊体外循环后胎羊心肌损伤和保护的病例生理过程，我们推测三者可能形成TNF-a/IL-6/IL-10信号通路介导胎儿体外循环后胎羊心功能的损伤和保护。

目录

声明

个人简历

摘要

前言

1 主要设备与实验试剂

1．1 实验动物

1．2 胎羊手术主要设备，耗材及试剂

1．2．1 仪器设备

1．2．2 主要使用药品

1．2．3 手术耗材

1．3 IL-6，IL-10，TNF-a检测主要实验仪器及试剂

1．3．1 主要实验仪器

1．3．2 主要实验试剂

2 实验资料及方法

2．1 实验分组

2．2 麻醉和外科操作

2．3 样本采集及保存

2．4 记录生命体征、血流动力学指标

2．5 血清学指标检测

2．5．1 标本采集及保存

2．5．2 试剂盒内容及其配制方法

2．5．3 实验步骤

2．6 石蜡免疫组化检测胎羊心肌组织IL-6，IL-10，TNF-a

3 统计分析

4 结果

4．1 CPB前后主要观测指标

4．2 胎羊血清IL-6，IL-10，TNF-a的结果

4．2．1 血清IL-6(pg／ml)浓度变化

4．2．2 血清IL-10(pg／ml)浓度变化

4．2．3 血清TNF-a(pg／ml)浓度变化

4．3 石蜡免疫组化测定IL-6，IL-10，TNF-a在心脏组织表达比较

5 讨论

5．1 胎羊体外循环模型的建立

5．2 母羊麻醉

5．3 母羊机械通气

5．4 胎羊心脏

5．5 胎羊插管方式

5．6 胎羊保温及肝素化

5．7 胎羊羊水处理

5．8 胎羊体外循环中胎羊心肌组织中IL-6，IL-10，TNF-a的变化及其机制探讨

5．10 可能形成TNF-a／IL-6／IL-10信号通路介导体外循环后胎羊心肌组织的损害和保护

参考文献

全文总结

综述 IL-6，IL-10，TNF-a与疾病发生发展关系的初步研究

致谢

附录