四种乳腺癌细胞系中程序性细胞死亡因子4的表达情况和相关研究

摘要

目的: 分析程序性细胞死亡因子4(programmed cell death4，PDCD4)在常见的四种人乳腺癌细胞株MCF-7、T47D、SKBR-3、MDA-MB-231中的表达量与其体外迁移能力和侵袭能力的关系，初步探索PDCD4基因对乳腺癌发生发展的影响。 方法: 1、应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法在mRNA水平测定PDCD4基因在正常人乳腺上皮细胞株MCF-10A及四种常见的人乳腺癌细胞株MCF-7、T47D、SKBR-3、MDA-MB-231中的表达情况。 2、采用蛋白质印迹实验方法(Western-blot)从蛋白水平测定PDCD4基因在正常人乳腺上皮细胞株MCF-10A及四种常见的人乳腺癌细胞株MCF-7、T47D、SKBR-3、MDA-MB-231中的表达情况，并结合qRT-PCR的实验结果，探讨它们之间的关系，从而将PDCD4低表达和高表达的两种乳腺癌细胞株筛选出来。 3、采用Transwell小室实验法测定MCF-7、T47D、SKBR-3及MDA-MB-231这四种乳腺癌细胞株的侵袭能力，探讨PDCD4基因与其侵袭能力之间的关系。 4、采用划痕实验法测定MCF-7、T47D、SKBR-3及MDA-MB-231这四种乳腺癌细胞株的迁移能力，并探讨PDCD4基因与其迁移能力之间的关系。 结果: 1、PDCD4mRNA在正常人乳腺上皮细胞株MCF-10A中表达量最高(1.000±0.000)，在MCF-7(0.825±0.103)、T47D(0.674±0.086)、SKBR-3(0.438±0.071)及MDA-MB-231(0.270±0.038)这四种乳腺癌细胞株中的表达量依次降低，将五个细胞组PDCD4mRNA的表达量两两进行比较，差异均有统计学意义(P＜0.05)。 2、PDCD4蛋白在正常人乳腺上皮细胞株MCF-10A中表达水平最高(1.094±0.047)，在MCF-7(0.863±0.072)、T47D(0.627±0.105)、SKBR-3(0.450±0.044)及MDA-MB-231(0.335±0.058)这四种乳腺癌细胞株中的表达水平依次降低，将五个细胞组PDCD4蛋白的表达水平两两进行比较，差异均有统计学意义(P＜0.05)。 3、PDCD4mRNA与PDCD4蛋白在这五个细胞组中的表达具有正相关关系(r=0.963，P＜0.001)。 4、Transwell小室实验法测定的这四种乳腺癌细胞株穿过半透膜的细胞数分别为:MCF-7(20±8)、T47D(43±8)、SKBR-3(68±12)及MDA-MB-231(97±13);划痕实验法测定的这四种乳腺癌细胞株的划痕愈合率分别为:MCF-7(16.67±4.22)、T47D(25.00±3.00)、SKBR-3(33.33±4.25)及MDA-MB-231（46.15±3.44），两两比较这四种乳腺癌细胞组间的侵袭能力和迁移能力，差异均有统计学意义(P＜0.05)，并且这四种乳腺癌细胞的迁移能力和侵袭能力具有正相关关系(r=0.918，P＜0.001)。 5、PDCD4mRNA及PDCD4蛋白在这四种人乳腺癌细胞的表达量与其侵袭能力呈负相关，相关系数分别为r=-0.769，P=0.004＜0.05;r=-0.729，P=0.007＜0.05。并且，这四种人乳腺癌细胞的PDCD4mRNA及PDCD4蛋白的表达量也与其体外迁移能力表现出负相关性，其相关系数分别为r=-0.861,P＜0.001;r=-0.856,P＜0.001。 结论: 1、PDCD4基因在正常人乳腺上皮细胞株及四种常见的人乳腺癌细胞内的表达量依次为:MCF-10A＞MCF-7＞T47D＞SKBR-3＞MDA-MB-231。 2、四种常用的人乳腺癌细胞的体外迁移能力及侵袭能力大小排序为:MCF-7＜T47D＜SKBR-3＜MDA-MB-231。迁移能力和侵袭能力之间表现出明显的正相关性，均能够衡量乳腺癌细胞的扩散和转移能力。 3、乳腺癌细胞中PDCD4基因的表达量与其侵袭和迁移能力均具有显著的负相关性，提示PDCD4基因可能参与了乳腺癌细胞的扩散和转移等生物学行为。