毛细管电泳电化学发光在含氮化合物中的应用研究

摘要

毛细管电泳-电化学发光（Capillary Electrophoresis Electrochemiluminescence，简称CE-ECL）技术，是当今分析化学前沿领域中一种极具潜力的微分离检测技术。最近几年来，基于Ru(bpy)32+的CE-ECL以其灵敏度高、仪器简单等特点成为一种非常重要的分离检测方法，它不仅具有毛细管电泳分离的高效、快速、灵敏和微量等特点，又发挥了电化学发光检测的高选择性、高灵敏度等优点。这些优点的结合使CE-ECL检测技术在药物分析、生物分析、食品分析等各领域具有广泛的应用，也越来越多地用于实际样品的分离和分析工作中。 本论文研究的目的在于发展完善毛细管电泳-电化学发光检测技术，探索新的分析应用体系，建立含氮化合物检测的新技术和新方法。主要研究内容和所得结果如下： 1.建立了毛细管电泳-电化学发光（CE-ECL）法测定人尿中阿莫西林的新方法，并将该方法用于人尿中阿莫西林药代动力学的研究。结果表明：阿莫西林在尿液中平均回收率为95.35％，该方法的线性范围为0.001～5.0μg/mL，检出限(3σ)为0.32ng/mL，对1.0μg/mL阿莫西林连续测定6次，其相对标准偏差小于2.0％，给药后6h内的排泄率为44.54％，人尿中阿莫西林最大药物浓度出现时间为1.0～1.5h。本方法用于人尿中阿莫西林药代动力学的研究具有快速、简便、灵敏、样品用量少等特点。 2.建立了一种用毛细管电泳-电化学发光法测定富硒酵母中硒代蛋氨酸含量的新方法，考察了工作电极电位、磷酸盐缓冲溶液浓度及pH、分离电压、进样电压和进样时间等实验条件对硒代蛋氨酸测定的影响。在优化实验条件下，其测定浓度的线性范围为0.001～0.5mg/L（相关系数为0.9996），检出限(3σ)为0.39μg/L，富硒酵母中硒代蛋氨酸的平均回收率为97.7％。本方法快速、灵敏、检出限低，用于富硒酵母中硒代蛋氨酸含量的测定，结果令人满意。 3.建立了一种用乙醛作为衍生试剂的柱前衍生毛细管电泳-电化学发光法测定人尿中的盐酸二甲双胍的新方法，盐酸二甲双胍与乙醛的衍生反应在磷酸盐的缓冲溶液中进行。在最优的实验条件下：工作电极电位1.25V(Ag/AgCl)、发光池中5 mM Ru(bpy)32+和50mM pH7.5的磷酸盐缓冲溶液、衍生试剂乙醛的浓度为1.356 mmol?L-1、衍生反应时间为120min、衍生反应缓冲溶液为0.3mol·L-1pH7.5的磷酸盐、分离缓冲溶液pH10.5（含7.5 mmol·L-1磷酸盐，7.5mmol·L-1硼酸盐，6mmol·L-1硫酸钠和2mmol·L-1的β-环糊精）、分离电压8kV、进样电压10kV、进样时间8s，衍生后的盐酸二甲双胍的ECL强度和灵敏度比衍生前的提高120多倍。其测定浓度的线性范围为0.01～15μg/mL（相关系数为0.9943），检出限(3σ)为2.3ng/mL。