肝癌磷蛋白质组学分析及其调控网络研究

摘要

原发性肝癌(primary liver cancer，PLC，以下简称肝癌)是发源于肝脏能引起极高的死亡率的恶性肿瘤。肝癌和肺癌及胃癌并称世界上的三大癌症。肝癌的发病原因较为复杂，其具体的发病机理尚未完全清楚。目前肝癌的治疗方法主要有肝癌切除手术、移植手术、全身化学疗等。但由于供体紧张、费用高、术后复发等因素，肝癌的治疗受到了严重的影响，选择更好的肝癌治疗方法显得迫在眉睫。蛋白质磷酸化修饰是蛋白质翻译后的一种重要修饰方式，磷酸化修饰在生命的活动过程中起着非常重要的调控作用，它影响着生命的多种活动，包括细胞的增殖、分化、发育、信号转换和细胞凋亡等。对肝脏癌变组织细胞进行磷酸化蛋白质组学的研究有助于更深入的了解蛋白磷酸化对肝脏组织细胞的影响，进一步阐明肝癌疾病发生的分子作用机制，找出该疾病的特异性标记物以及作用靶标，为该病的治疗提供新的策略和良好的理论基础。
　　目的:(1)高通量筛选和鉴定肝癌组织细胞和癌旁组织细胞差异表达的蛋白和磷酸化蛋白，并确定这些蛋白的磷酸化位点。(2)针对磷酸化蛋白的丰度分布进行丰度分析，绘制磷酸化蛋白丰度分布图。(3)查询差异表达的蛋白及磷酸化蛋白功能并归类，从整体上建立肝癌疾病的蛋白和磷酸化蛋白组数据库。
　　方法:采用iTRAQ蛋白标记技术和TiO2磷酸化蛋白富集技术，结合液相串联质谱分析，对8名肝癌患者移植换下肝脏的癌变组织和癌旁组织中的差异蛋白和磷酸化蛋白质进行研究，寻找出其中的差异表达。
　　结果:实验共鉴定到癌变组织细胞组相对于癌旁组表达上调的蛋白158个，下调的蛋白71个。癌变组织相对于癌旁组织磷酸化肽段差异表达总共87个，其中上调的有56个，下调的有31个。
　　结论:(1)肝脏癌变组织与癌旁组织中蛋白的表达和蛋白质的磷酸化修饰存在着显著差异。(2)肝脏组织中蛋白质的磷酸化与细胞的生物调节、生物转化、新陈代谢和刺激等生物过程密切相关，可能会在肝癌的发生和发展过程中发挥重要作用。

目录

摘要

英文缩略词对照

1 前言

1．1 研究背景及意义

1．2 蛋白质组学简介

1．3 iTRAQ定量分析技术

1．4 磷酸化蛋白质组学简介

1．5 发展趋势

2 材料和方法

2．1 研究对象

2．2 技术路线

2．3 实验主要仪器和试剂

2．4 实验步骤

2．5 信息分析流程

3 实验结果

3．1 iTRAQ标记差异蛋白组分析

3．2 TiO2富集磷酸化蛋白分析

3．3 磷酸化蛋白GO注释

3．4 鉴定质量评估

4 分析与讨论

5 总结与展望

参考文献

附表

读硕期间学术研究情况

致谢

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