猪Fas、Caspase-3、白细胞介素4、白细胞介素10基因的克隆和序列分析

摘要

本研究从PK-15细胞和ConA刺激的巴马小型猪的外周血淋巴细胞分别提取总RNA，用RT-PCR方法扩增出猪细胞凋亡基因Fas、Caspase-3和细胞因子白细胞介素4(IL-4)和白细胞介素10(IL-10)，将其分别克隆到PMD18-T载体上，进行序列分析。结果显示，克隆的Fas与GenBank上登录的猪Fas基因序列同源性为100﹪，在核苷酸序列与推导的氨基酸水平上，与人、牛、羊的同源性分别为73.4﹪、79.2﹪、76.4﹪和56.2﹪、67.0﹪、64.6﹪。Caspase-3的基因序列与GenBank上登录的猪Caspase-3基因核苷酸序列与推导的氨基酸序列同源性为98.9﹪和98.6﹪。与人、鼠Caspase-3基因的核苷酸序列与推导的氨基酸序列同源性为88.6﹪、83.5﹪和87.8﹪、86.7﹪。

目录

文摘

英文文摘

前言

综述一Fas和Caspase-3研究进展

综述二白细胞介素4和白细胞介素10研究进展

本研究的目的和意义

1材料与方法

1.2材料

1.1.1主要实验材料

1.1.2引物

1.1.3试剂及配制

1.1.4仪器

1.2方法

1.2.1细胞的制备

1.2.2 RNA的抽提

1.2.3反转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)

1.2.4 PCR产物胶回收

1.2.5 DH5α菌种的复苏

1.2.6感受态细胞的制备

1.2.7基因克隆

1.2.8重组质粒酶切鉴定

1.2.9基因测序

1.2.10测序结果的处理与分析

2结果

2.1 Fas和Csapase-3的基因扩增

2.2 Fas和Csapase-3的重组质粒的鉴定

2.3 IL-4和IL-10的基因扩增

2.4 IL-4和IL-10重组质粒的鉴定

2.5测序结果及分析

2.5.1 Fas和Caspase-3测序结果及分析

2.5.2 IL-4和IL-10测序结果及分析

2.6猪与其它种间动物Fas基因核苷酸和氨基酸比较分析

2.7猪与其它种间动物Caspase-3基因核苷酸和氨基酸比较分析

2.8巴马猪与其它品种猪IL-4基因核苷酸和氨基酸比较分析

2.9巴马猪与其它种间动物IL-4基因核苷酸和氨基酸比较分析

2.10巴马猪与其它种间动物IL-10基因核苷酸和氨基酸比较分析

3讨论

4结论

参考文献

致谢

攻读学位期间发表论文情况