广西十种优质品种鸡IFN-γ和IL-2基因的克隆及IFN-γ表达与活性研究

摘要

γ-干扰素(IFN-γ)和白细胞介素-2(IL-2)是鸡体内重要的细胞因子，在鸡抗病和免疫应答反应中占有重要地位。本研究首次将广西十种优质品种鸡外周血淋巴细胞在刀豆蛋白A(Con A)的刺激下体外培养16h后，提取淋巴细胞总RNA，应用RT-PCR技术扩增出鸡IFN-γ和IL-2的cDNA，克隆到pMD18-T载体上并测序。测序结果显示：广西十种优质品种鸡Y一干扰素基因都编码145个氨基酸的成熟蛋白，分子量约为16.8kD，与哺乳动物和其他品种鸡核苷酸序列的同源性分别为38.8％-40.6％、99.2％-100％，氨基酸的同源性为23.6％-29.1％、97.6％-99.4％，克隆的鸡白细胞介素2基因都编码143个氨基酸的成熟蛋白，分子量约为16.3kD，与哺乳动物和其他品种鸡核苷酸序列的同源性分别为25.2％-30.3％、98.6％-99.8％，氨基酸的同源性为14.6％-16.7％、96.5％-99.3％．为了克隆编码IFN-γ成熟蛋白基因，设计一对引物，将鸡IFN-γ插入pGEX-4T-1载体上，构建了原核表达质粒pGEX-mIFN-γ，并转化大肠杆菌BL21，以EcoRI和Sa／I双酶切筛选鉴定转化子，用IPTG诱导融合蛋白表达。通过SDS-PAGE和Westernblot分析，发现pGEX-m IFN-γ在42.4kD处出现融合蛋白条带，证实鸡IFN-γ基因得到了正确转录和表达。首次采用F48E9 NDV标准强毒株，测定IFN-γ蛋白抗病毒的活性为1.33×10<'4>U／ml，深入研究IFN-γ的生物学效应，为基因工程干扰素和抗病免疫制剂的研制开发奠定了良好的基础。

目录

摘要

第一章文献综述

第二章广西十种优质品种鸡IFN-γ基因的克隆与序列比较分析

第三章广西十种优质品种鸡IL-2基因的克隆与序列比较分析

第四章广西优质品种鸡IFN-γ基因的克隆与原核表达

第五章广西优质品种鸡IFN-γ基因原核表达蛋白的活性测定

结论

参考文献

附录-本论文常用英文缩写

致谢

攻读学位期间发表文章