中华鳖“浮肿病”病原菌的鉴定及迟钝爱德华氏菌溶血活化基因的克隆

摘要

从患浮肿病的中华鳖中分离到三株细菌：分别命名为1号菌、2号菌和3号菌。经形态及生理生化鉴定，1号菌为肺炎克雷伯氏菌，2号菌为温和气单胞菌或者嗜水气单胞菌，3号菌为迟钝爱德华氏菌。 对三株菌的16SrDNA序列进行了扩增、克隆、测序和序列分析。序列分析结果显示，1号菌和肺炎克雷伯氏菌血清型亲缘关系最近：2号菌和嗜水气单胞菌的亲缘关系最近：3号菌和迟钝爱德华氏菌最近。综合考虑形态及生理生化特征和16SrDNA序列分析结果，可以判定，1号菌是肺炎克雷伯氏菌，2号菌是嗜水气单胞菌：3号菌是迟钝爱德华氏菌。 后肢肌肉注射感染实验表明，1号菌与2号菌在本试验中没有造成中华鳖的死亡，不是致病菌，3号菌对其有很强的致病性。 药敏实验中，发现三株菌的药物敏感性有较大差别。1号菌对氯林可霉素、丙氟哌酸不敏感。2号菌对青霉素、四环素、痢特灵、林可霉素不敏感。3号菌对青霉素、万古霉素、氨苄青霉素、苯唑青霉素不敏感。 应用PCR扩增，从迟钝爱德华氏菌染色体DNA扩出爱德华氏菌溶血活化基因，DNA序列分析表明：克隆的片断由599个碱基组成。与高大庆等人分离的eha同源性为100％。 本研究通过对水生动物细菌疾病的快速诊断以及爱德华氏菌溶血活化基因的研究，为今后爱德华氏菌的研究打下了基础。

目录

文摘

英文文摘

声明

前言

一.中华鳖简介

1.外部形态

2.摄食特点

3.生理特点

4.种质资源

二.不产类病原菌的检测方法

1.DNA指纹技术

2.PCR检测技术

3.16SrRNA检测技术

4.其它的检测技术

三.迟钝爱德华氏菌的研究概况

1.迟钝爱德华氏菌的特征

2.迟钝爱德华氏菌的宿主范围

3.迟钝爱德华氏菌的感染情况

4.对迟钝爱德华氏菌致病性的研究

四.有关爱德华氏菌病防治方面的研究

1.化学治疗法

2.免疫学防治方法

3.生物防治

五.环境因素对鳖病的影响

1.水质

2.养殖密度

3.pH值

4.温度

六.本研究的目的和意义

实验一、中华鳖浮肿病疑似病原菌的形态及生理生化鉴定

一.材料和方法

1.病鳖来源

2.菌株分离与培养

二.结果

1.1号菌形态及生理生化鉴定

2.2号菌形态及生理生化特征

3.3号菌形态及生理生化鉴定

三.讨论

实验二、疑似病原菌16SrDNA的克隆及序列分析

一.16SrDNA基因的扩增

1.材料与方法

2.结果

二.16SDNA的克隆

1.材料和方法

2.16SrDNA序列的测定

3.16SrDNA序列分析与比较

4.结果

三.讨论

1.细菌DNA的提取

2.16SrDNA的克隆序列及分析

实验三、疑似病原菌的人工感染实验和药敏实验

一.材料和方法

1.菌株

2.实验动物

3.培养基

4.药敏纸片

5.人工感染实验

6.药物敏感实验

二.结果

1.疑似病原菌的致病性

2.肺炎克雷伯氏菌的药敏实验结果

3.嗜水气单胞菌的药敏实验结果

4.迟钝爱德华氏菌的药敏实验结果

三.讨论

1.细菌的人工感染试验

2.菌株的药物敏感性

实验四、迟钝爱德华氏菌溶血活化基因的克隆及分析

一.材料与方法

1.菌株

2.培养基

3.试剂及仪器

4.引物设计

5.溶血素基因的PCR扩增、克隆

6.克隆片断的DNA序列测定及分析

二.结果

1.溶血活化基因PCR扩增及克隆

2.ehaNA的序列分析

3.同源性比较

三.讨论

结论

参考文献

致谢

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