番茄温敏核不育系花药培养相关因子的研究

摘要

本论文对番茄温敏核不育系T7、T8花药培养的研究主要包括了两个方面：(1)番茄温敏核不育系花粉粒各个发育时期的细胞学观察试验；(2)番茄温敏核不育系花药培养。其中花药培养主要包括了接种材料的消毒灭菌试验、花药愈伤组织诱导试验、花药愈伤组织分化试验三部分。主要试验结果如下：
　　 1、外植体消毒灭菌试验结果：
　　 T7花蕾的最佳灭菌处理为：0.1％HgCI210min+15％NaCI010min，其污染率和出愈率分别为40.6％和17.7％; T8的最佳天菌处理为：0.1％HgCI215min+10％NaCI015min，其污染率和出愈率分别为51.0％和18.3％:75％酒精对花蕾擦拭消毒灭菌处理，容易引起接种花药褐化死亡。
　　 2、温敏核不育系T7、T8及普通杂交品种王蔬、红日4个番茄品系的不同发育时期花粉粒细胞学观察结果：
　　 (1)花蕾长度约为0.2cm，其花粉粒发育处于二分体或四分体时期；(2)花蕾长度约为0.4～0.5cm，其花粉粒发育处于单核早期；(3)花蕾长度约为0.6～0.7cm，其花粉粒发育处于单核靠边期；(4)花蕾长度约为0.7～0.8cm，其花粉粒发育处于单核靠边期或二核期；(5)花蕾长度约为1cm，其花粉粒发育处于二核或三核期；(6)花蕾长度约为lcm，花瓣展开小于90度，其花粉粒发育处于二核期、三核期或成熟期；(7)花蕾长度约为lcm，花瓣展开度大于90度，其花粉粒处于成熟期。
　　 3、花药愈伤组织组织诱导试验结果：
　　 (1)番茄花蕾的小孢子处于单核靠边期为最佳取材时期，T7、T8、王蔬和红日的花药愈伤组织诱导率分别为11.8％，13.7％、18.0％和18.1％。
　　 (2)番茄花蕾经4℃低温预处理后对降低花药褐化率，提高花药愈伤组织质量效果明显；T7花蕾低温预处理的适宜时间为24h，花药愈伤组织诱导率为19.50％;T8花蕾低温预处理的适宜时间为48h，花药愈伤组织诱导率为19.00％;番茄普通杂交种王蔬、红日花蕾低温预处理的适宜时间分别为36h和24h，愈伤组织诱导率分别达到28.57％、31.25％。
　　 (3)通过对2，4-D、NAA、KT、CPPU和6-BA等5种激素进行双因子激素组合的愈伤组织诱导比较试验，结果表明：番茄温敏核不育系T7以KTlmg/L+NAA0.3mg/L组合的诱导效果最好，花药愈伤组织诱导率为21.0％；番茄温敏核不育系T8以6-BA2mg/L+NAA0.5 mg/L组合的诱导效果最好，花药愈伤组织诱导率为17.5％。
　　 (4) TDZ对番茄温敏核不育系花药愈伤组织诱导的最适培养浓度为0.02mg/L;花调素对番茄温敏核不育系T7、T8花药愈伤组织诱导的最适浓度分别为0.03mg/L、0.02mg/L;TDZ和花调素对花药愈伤组织诱导均有促进作用。
　　 (5)培养基中添加香蕉汁后，花药容易褐化死亡，愈伤组织质量降低，愈伤组织诱导率比对照处理低，差异显著。
　　 (6)通过对KT、NAA、6-BA、2，4-D、TDZ和FR等6种激素进行多因子激素组合的愈伤组织诱导比较试验，番茄温敏核不育系T7以6-BA3.0mg/L+2，4-D2.0mg/L+TDZ0.02mg/L组合的诱导效果最好，花药愈伤组织诱导率为22.7％;T8以6-BA2.0 mg/L+2，4-D2.0 mg/L+TDZ0.02 mg/L组合的诱导效果最好，花药愈伤组织诱导率为23.7％。
　　 (7)在培养基中添加椰子汁对番茄花药愈伤组织的诱导有一定的促进作用，愈伤组织诱导的适宜椰子汁浓度为100ml/L, T7、T8出愈率分别为23.6％、21.3％。
　　 (8)采用将番茄花药筒一分为二的接种方式可以减少对花药的损伤，降低花药褐化率，提高愈伤组织诱导率，T7、T8花药褐化率分别为32.7％、30.7％，出愈率为26.7％、28.7％。
　　 (9)培养基中添加浓度为0.5mg/L的AgN03，能降低花药褐化率，提高花药愈伤组织诱导率和质量，T7、T8花药愈组褐化率分别为32.0％、30.0％；愈伤组织诱导率分别为29.0％、27.3％。
　　 4、花药愈伤组织分化试验结果表明：
　　 (1) MS对番茄温敏核不育系花药愈伤组织分化的效果优干1/2MS、Miller和B5基本培养基，花药愈伤组织的胚状体发生数量最多。
　　 (2)在分化培养基中的蔗糖用量为20g/L时，花药愈伤组织分化出较多的胚状体和根。
　　 (3)通过对6-BA、2，4-D、TDZ、KT、NAA和IAA等6种激素进行不同组合的愈伤组织分化比较试验，结果表明：番茄温敏核不育系T7、T8均以6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L+TDZ0.02mg/L组合的分化效果最好，胚状体分化数量多，并能诱导出胚状体小芽。
　　 (4)分化培养基：MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L+TDZ0.02mg/L+糖20g/L+琼脂6g/L+椰子汁100ml/L促进花药愈伤组织分化出芽和根，形成完整花粉小植株。