广西巴马小型猪动脉粥样硬化模型制作的初步研究

摘要

动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是一种由遗传和环境共同作用所引起的动脉血管疾病,是心脑血管疾病发病的基础。其主要特征是血管内膜增厚,管腔变狭窄,不稳定的纤维帽破裂,形成急性血栓。动脉粥样硬化的致病机制尚不是很清楚,制作动物模型研究其发生发展机制显得尤为重要。小型猪在解剖学,生理学,血液和血液生化指标以及疾病发生机理等方面与人极其相似,常被用于制作心脑血管疾病和糖尿病等方面的动物模型。本实验以广西巴马小型猪为实验材料,选取糖尿病模型猪10头,常规条件饲养的3月龄和6月龄猪各10头,分别作为实验组1,实验组2和实验组3,饲以高脂高胆固醇饲料;选取6月龄猪10头作为对照组并按常规条件进行饲养。
　　在饲喂高脂高胆固醇饲料三个月后,实验组1动物出现高胆固醇血症,动脉粥样硬化指数(atherosclerosis index,AI)均大于4.0,血管切片显示血管内膜均出现不同程度的损伤,腹主动脉和冠状动脉出现明显的内膜增厚,纤维斑块隆起,血管腔变窄;HE染色结果显示病灶处平滑肌细胞排列疏松紊乱,并存在大量的炎症细胞和泡沫细胞,伴随有典型的胆固醇结晶和斑块底部钙化,最严重的可达 V级病变。
　　实验组2和实验3组饲喂高脂高胆固醇饲料后,体重增加明显,实验开始第5个月,实验组2有4头猪AI值连续3个月超过3.8;实验组3实验开始第2个月和第3个月各有1头猪AI值连续3个月超过3.8。实验组3饲喂3个月,6个月后各屠宰3头,做血管组织切片,HE染色结果显示已发病猪的血管内膜损伤,有明显的纤维斑块隆起,中层平滑肌细胞紊乱,有散在的炎症细胞和泡沫细胞,胆固醇结晶和钙化不明显,纤维病变可达II级或III级。
　　将建模成功的猪的切片与AI值做关联分析,初步确定广西巴马小型猪AS模型成功建立的判定标准为:实验猪发生AS疾病时,AI值应持续3个月或3个月以上大于3.8。实验组1所有猪的AI值都远远高于3.8,且持续3个月以上,表明都已患动脉粥样硬化疾病;实验组2和实验组3发生AS疾病的猪分别有2和4头。
　　克隆广西巴马小型猪单核细胞趋化蛋白-1基因编码区全长,将克隆获得的片段与NCBI上公布的猪的MCP-1序列比对,没有发现突变位点。其长度为300bp,与人的同源性为84.4％,与兔和小鼠的同源性分别为82.1%和74.2%。广西巴马小型猪MCP-1基因保守的半胱氨酸位置和人的一致,推测与人的MCP-1可能有相同或相似的二级结构。
　　对实验组3和对照组的单核细胞趋化蛋白-1和基质金属蛋白酶-9的转录水平和翻译水平的表达量进行研究。免疫组化结果显示,实验组3中MCP-1蛋白,MMP-9蛋白和LOX-1蛋白均有强阳性表达,对照组无表达或弱表达。实时定量PCR结果显示:实验组3与对照组比较,MCP-1基因表达量随时间延长而增高,颈动脉处MCP-1基因表达量具有显著性差异(p<0.05);但两组小型猪的MMP-9基因表达水平差异不显著(p>0.05)。

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第一章 文献综述

1 动脉粥样硬化

2 动脉粥样硬化动物模型研究的进展

3 动脉粥样硬化相关基因的研究进展

第二章 实验研究

1. 实验材料

2. 实验仪器

3 讨论

结论

致谢

攻读硕士学位期间发表论文情况