鸡源致病性沙门氏菌毒力基因与致病性的相关性研究

摘要

沙门氏菌具有广泛的宿主，是一种重要的人畜共患病的病原菌。近年来，抗菌药物在临床上的普遍使用甚至滥用，导致沙门氏菌的耐药问题越来越严重。沙门氏菌能够入侵宿主体内增殖和致病，与其毒力基因密切相关。本研究对鸡源致病性沙门氏菌进行分离鉴定，对其耐药性、致病性进行测定，对其耐药基因、毒力基因进行检测，分析耐药基因与耐药表型、毒力基因与致病性的关系，为沙门氏菌病的防治提供科学依据。
　　采集疑似病鸡的组织病料，通过SC增菌液对沙门氏菌进行增菌培养。用XLD琼脂平板对沙门氏菌进行分离培养。选取纯培养物的单个菌落，分别进行生化鉴定、血清学鉴定和PCR鉴定等，共获得55株沙门氏菌分离株。这些菌株包含4个血清群，A群6株，B群23株，C群1株，D群25株。其中D群约占45％，为沙门氏菌优势血清群。
　　采用CSLI推荐的K-B琼脂法测定55株沙门氏菌分离株对18种抗菌药物的敏感性。结果显示，55株沙门氏菌分离株对利福平、阿莫西林、青霉素G、苯唑西林以及头孢噻吩的耐药率达到100％;对红霉素、林可霉素、多粘菌素B、复方新诺明及呋喃妥因耐药率达到90％以上;对强力霉素、链霉素及诺氟沙星的耐药率在50％～90％之间:对庆大霉素及大观霉素的耐药率在10％以下，分别为7.27％、3.64％。
　　利用PCR方法检测55株沙门氏菌分离株的16种耐药基因blaTEM、 blaPSE、blaCMY、aadA1、Aph(3)-Ⅱa、aadA2、tetB、tetG、tetM、tetX、Sul1、Sul3、 qnrA、qnrB、qepA、qnrS。结果显示，55株沙门氏菌分离株中，含有3种耐药基因的菌株比例为25.45％，含有5种耐药基因的菌株比例为21.82％，含有2种耐药基因的菌株比例为21.82％，含有4种耐药基因的菌株比例为20.00％，含有1种耐药基因和7种耐药基因的菌株比例分别为3.64％和1.82％。在所检测耐药基因中，tetX的检出率最高，达到78.18％，而blaPSE、Aph(3)-Ⅱa、aadA2、qnrA、qnrB则未被检出。
　　利用PCR方法检测55株沙门氏菌分离株的31种毒力基因（质粒毒力基因spvR、spvA、spvB、spvC、spvD;毒力岛基因invH、sipA、sipB、sopA、sopD、avrA、hilA、iacP、prgK、ssaB、ssaQ、sifA、sseL、ssrA、ttrB、mgtC、 misL、rmbA、rhuM、sugR、orf319、siiD(spi4D)、siiE、spi4H、sopB、pipC)。结果显示，质粒毒力基因的检出率均在60％以上;毒力岛基因ttrB和orf319检出率最高(92.73％)，而ssaQ以及sifA检出率均在10％以下。
　　通过小鼠致病性试验检测55株沙门氏菌分离株的致病性。结果显示，所有分离株对小鼠均具有致病性，但致死的时间和剂量有所差异。随机选取其中10株进行测定，其半数致死量(LD50)介于3.18×108cfu/mL和4×107 cfu/mL之间。
　　以上研究结果表明，本研究分离鉴定获得的55株鸡源致病性沙门氏菌分离株中，D群血清型比例约为45％，为优势血清群;沙门氏菌普遍存在耐药性，多重耐药现象严重;分离菌株对小鼠具有致病性;其耐药表型与耐药基因、致病性与毒力基因之间均呈现正相关。

目录

论文说明

声明

摘要

英文单词缩写对照表

1．1．沙门氏菌概述

1．1．1．沙门氏菌的来源及分布情况

1．1．2．沙门氏菌生物学特性、生化特性及其血清型分型

1．1．3．沙门氏菌流行病学及其危害

1．1．4．沙门氏菌的耐药现状及耐药机制

1．1．5．沙门氏菌耐药机制的研究

1．2．沙门氏菌毒力因子的研究

1．2．1．脂多糖

1．2．2．毒力岛

1．2．3．质粒毒力基因

1．3．研究的目的与意义

1．4．技术路线

第二章 材料与方法

2．1．材料

2．1．1．菌株来源

2．1．2．试验动物

2．1．3．主要试剂

2．1．4．药敏纸片及生化管

2．1．5．主要仪器

2．2．方法

2．2．1．沙门氏菌的分离纯化

2．2．2．沙门氏菌的鉴定

2．2．3．沙门氏菌分离株的药物敏感性试验

2．2．4．沙门氏菌分离株的耐药基因PCR检测

2．2．5．沙门氏菌分离株的致病性试验

2．2．6．沙门氏菌分离株的毒力基因PCR检测

第三章 结果

3．1．细菌的分离鉴定结果

3．1．1．革兰氏染色结果

3．1．2．生化鉴定结果

3．1．3．沙门氏菌血清型鉴定结果

3．2．沙门氏菌分离株药物敏感性试验结果

3．3．沙门氏菌分离株的耐药基因PCR检测以及测序结果

3．4．沙门氏菌分离株致病性的试验结果

3．5．沙门氏菌分离株毒力基因的PCR扩增以及测序结果

3．5．1．毒力岛基因的扩增以及测序

3．5．2．质粒毒力基因的扩增以及测序

3．6．毒力岛毒力基因以及质粒毒力基因检测结果

3．7．沙门氏菌分离株耐药表型与耐药基因的相关性

3．8．沙门氏菌耐药性与致病性的关系

3．9．沙门氏菌毒力基因与致病性的相关性

第四章 讨论

4．1．沙门氏菌毒力基因携带状况分析

4．2．沙门氏菌分离株耐药性与耐药基因

4．3．沙门氏菌分离株致病性与毒力基因

第五章结论

参考文献

致谢

攻读硕士学位期间发表的论文