绞股蓝多糖对小鼠腹腔巨噬细胞影响的研究

摘要

本研究采用中性红吞噬法、格里斯(Griess)试验、双抗体夹心法以及荧光定量PCR(Quantitative real time polymerase chain reaction，qRCR)技术分别测定了巨噬细胞的吞噬能力，增殖能力，一氧化氮(Nitric oxide，NO)的分泌量，乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase，LDH)、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α，TNF-α)和白介素1β（Interleukin1beta，IL-1β）的分泌量以及巨噬细胞钙调素(Calmodulin，CaM)、刺激性G蛋白α(Stimulatory GTP-blinding protein alpha，GSα)基因的表达，探索不同浓度的绞股蓝多糖（Gynostemma pentaphyllum polysaccharides，GPP）对小鼠腹腔巨噬细胞的影响，进一步探讨GPP在机体免疫功能的调节作用及其可能的作用机理，为GPP的临床应用和进一步开发提供理论依据。结果表明:
　　1、经GPP处理后的腹腔巨噬细胞吞噬能力都有所增强。不同浓度的GPP刺激小鼠巨噬细胞后，吞噬能力无明显的量效关系，其中GPP的浓度为200μg/mL时，吞噬活性最高，与空白对照组相比差异显著(P＜0.05)。
　　2、从腹腔巨噬细胞增殖水平来看，不同浓度的GPP处理组都可以促进小鼠腹腔巨噬细胞增殖。当GPP的浓度达到50μg/mL及以上时，与空白对照组相比差异显著（P＜0.05），但其组间差异不明显。
　　3、不同浓度的GPP刺激小鼠腹腔巨噬细胞均能显著促进NO分泌(P＜0.05)，且NO分泌量随着GPP浓度的增加而增加。
　　4、经各浓度GPP和LPS作用后的小鼠腹腔巨噬细胞，其分泌LDH的量均有所增加，但不呈正相关。其中GPP浓度为50μg/mL和100μg/mL时，与空白对照组相比，差异显著(P＜0.05)。
　　5、从TNF-α的分泌水平来看，当GPP的浓度达到25μg/mL及以上时，巨噬细胞TNF-α的分泌量较对空白照组而言差异显著（P＜0.05）;且随着GPP浓度的增加，TNF-α的分泌量增加比较明显，当浓度达到100μg/mL时达到最大值，当GPP浓度继续增加时，TNF-α的分泌量下降。
　　6、从IL-1β的分泌量来看，当GPP的浓度达到25μg/mL及以上时，巨噬细胞的IL-1β分泌量与空白对照组相比显著差异（P＜0.05），且随着GPP浓度的增加，IL-1β的分泌量增加比较明显，当GPP为100μg/mL时对IL-1β分泌的促进作用最强(P＜0.05)，之后IL-1β的分泌量会随着浓度的增加而减少。
　　7、各GPP给药组均可提高小鼠腹腔巨噬细胞钙调素基因的表达，与空白对照组相比，25μg/mL及以上GPP给药组均有显著性差异(P＜0.05)。其中GPP浓度在100μg/mL时CaM基因表达量达到最高，之后CaM基因表达量会随着浓度的增加而降低。
　　8、不同浓度的GPP都可显著提高小鼠腹腔巨噬细胞GSα基因的表达(P＜0.05)。其中GPP浓度在25μg/mL时，对小鼠腹腔巨噬细胞GSα基因的表达促进作用最强。
　　结论:GPP对小鼠腹腔巨噬细胞有活化作用，GPP能刺激巨噬细胞增殖从而增加小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力，能提高小鼠腹腔巨噬细胞分泌NO以及细胞因子LDH、TNF-α和IL-1β，能上调CaM和GSα基因的表达。综合本研究实验结果来看，当GPP浓度为50μg/mL时，效果明显;100μg/mL时效果最佳。

目录

声明

摘要

中英文缩写表 Abbreviations

第一章 综述部分

1．1 绞股蓝研究进展

1．2 巨噬细胞

1．3 NO

1．4 细胞因子LDH、TNF-α和IL-1β

1．5 钙调素

1．6 G蛋白

1．7 多糖生物活性研究概况

1．8 其他活性

1．9 本研究的意义和目的

2．1 实验材料

2．2 试验方法

2．3 结果和分析

2．4 讨论

第三章 结论

参考文献

附录

致谢

作者简介

攻读硕士学位期间发表论文情况