骨髓间充质干细胞和骨骼肌卫星细胞成肌分化的研究

摘要

心肌梗塞疾病是长期困扰医学界的难题,因为心肌坏死后不能再生,损伤心肌的修复是由成纤维细胞完成的.人们正在探索的干细胞移植技术,为病损心脏的细胞重建及衰竭心脏的功能恢复,提供了一种全新的治疗策略.研究表明移植后的骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)和骨骼肌卫星细胞可以在心梗坏死区向心肌分化.体外实验也发现在特定的诱导因子作用下MSCs可向心肌细胞分化.该实验初步探讨5-氮胞苷体外诱导MSCs向心肌分化的最佳条件和体外分化的过程,骨骼肌卫星细胞体外分化的过程以及N-ACh受体表达,为进一步研究细胞在体移植或临床应用提供实验依据.第一部分:体外培养Sprague-Dawley(SD)大鼠的MSCs,反复传代至P3、P6或P12;用5-氮胞苷诱导,比较不同诱导浓度组、不同诱导时间组和不同体重动物组MSCs的分化率,观察诱导后细胞分化过程中形态学的动态变化,并且用cardiac troponin Ⅰ、desmin和α-sarcomeric actin抗体鉴定分化的心肌样细胞,α-银环蛇毒素鉴定乙酰胆碱受体.第二部分:体外培养新生SD大鼠和鸡胚的骨骼肌卫星细胞,差速贴壁法纯化.观察细胞体外分化过程,用α-sarcomeric actin、desmin和skeletal myosin抗体鉴定骨胳肌特异性蛋白的表达.ACh刺激肌管收缩,并鉴定肌管表面的乙酰胆碱受体.总结二部分实验结果,得到以下结论:1、MSCs经10μmol/L浓度的5-氮胞苷体外诱导24h后易向心肌样细胞分化.2、幼年SD大鼠MSCs向心肌样细胞分化的分化率高于成年鼠.3、传代次数多的MSCs易向心肌样细胞分化并融合.4、骨骼肌卫星细胞体外分化为成肌细胞,融合成肌管并具有收缩功能.5、SD乳鼠的卫星细胞形成的肌管经分化培养后N-AChR呈块状聚集,而鸡胚的卫星细胞形成的肌管N-AChR表达微弱.

目录

文摘

英文文摘

第一章前言

第二章骨髓间充质干细胞的培养纯化、诱导分化和鉴定

第三章骨骼肌卫星细胞的培养纯化、诱导分化和鉴定

结论

参考文献

附录

英文缩写词汇表

致谢

原创性声明