海洋放线菌抗水产病原弧菌活性的研究

摘要

本研究从中国南海近海沉积物中分离出94株海洋放线菌，其中87.3％为链霉菌，其优势类群为烬灰类群和灰红紫类群。通过平板对峙试验考察了海洋放线菌对六种水产病原弧菌的抑菌活性以及降解大分子有机物活性。并且考察了盐度对其抑菌活性的影响。结果表明，24.5％的海洋放线菌对水产病原弧菌有较强的抑制活性；超过50％的海洋放线菌能够降解蛋白质、淀粉、黄豆粉、纤维素等大分子有机物；超过60％的海洋放线菌能够溶解细菌细胞壁。筛选出6株海洋放线菌除了对弧菌有较强抑制活性之外，还能够有效地抑制大肠杆菌、枯草杆菌、铜绿假单孢菌和金黄色葡萄球菌；并且能够降解多种大分子有机物。更重要的是，它们均能够在3％的盐度环境中正常生长，其中三株海洋放线菌的抑菌活性不受盐度的影响。　　铁对许多致病菌的生存和致病性都有着重要的作用，致病弧菌也不例外。首先，建立了一个比传统方法操作简便、成本低、对微生物毒性小、检出率高、受铁的弱亲和物质干扰小，适用范围更广的产铁载体活性初筛方法。筛选出52株具有产铁载体活性的海洋放线菌。讨论了环境中铁离子浓度在海洋放线菌对弧菌的抑制中的影响。发现四株具有产铁载体活性的海洋放线菌对弧菌的抑制活性随环境中铁离子浓度的增加而减弱。选取其中一株，与哈维氏弧菌H，通过共培养试验证明，铁营养竞争也是海洋放线菌抑制弧菌的机制之一。说明，控制环境中的铁离子浓度对于控制哈维氏弧菌病害有着重要的意义。　　哈维氏弧菌H在贫铁条件下容易被抑制，可能是因为缺乏有效的获得铁的能力，也可能是其生长对铁浓度的要求比较高。关于哈维氏弧菌在贫铁条件下应激产生的蛋白的研究未见报道。因此，初步探讨了哈维氏弧菌H在贫铁条件下应激产生的外膜蛋白的分离。通过对肽指纹图谱和飞行时间质谱测得的肽段序列分析，初步鉴定了哈维氏弧菌H在贫铁条件下应激产生的可能与铁转运相关一个外膜蛋白。

目录

摘要

引言

1.水产养殖中的弧菌病

2.我国海水养殖业及病害控制的现状

3.抗生素在水产养殖中的滥用

4.放线菌在微生物制剂中的应用

5.我国海洋放线菌研究现状

6.本研究的目的与意义

第1章抗弧菌的海洋放线菌的分离和特征

1.1前言

1.1.1海洋放线菌类群分布

1.1.2海洋放线菌的生物活性

1.1.3水产养殖中弧菌病害的防治

1.2材料与方法

1.3结果与分析

1.3.1海洋放线菌主要类群

1.3.2海洋放线菌抑制弧菌活性

1.3.3抗弧菌海洋放线菌的抗菌谱

1.3.4海洋放线菌对细菌细胞壁的酶解活性

1.3.5盐度对海洋放线菌生长和抑菌活性的影响

1.3.6海洋放线菌对大分子有机物的水解活性

1.4讨论

第2章铁对海洋放线菌抑菌性的影响

2.1前言

2.1.1微生物铁载体

2.1.2铁对弧菌致病能力的重要作用

2.1.3放线菌铁载体及海洋来源的铁载体

2.1.4产铁载体活性的筛选

2.2材料与方法

2.3结果与分析

2.3.1建立筛选产铁载体活性的方法

2.3.2海洋放线菌产铁载体活性

2.3.3产铁载体放线菌类群分析

2.3.4放线菌在含联吡啶培养基中的产酸获铁现象

2.3.5铁离子浓度对海洋放线菌抑菌活性的影响

3.3.6共培养中海洋放线菌A03对哈维氏弧菌H的抑制

2.3.7四株铁载体产生菌的分子鉴定

2.4讨论

第3章哈维氏弧菌H铁相关外膜蛋白及铁调控基因

3.1前言

3.1.1革兰氏阴性细菌的铁载体转运系统

3.1.2铁摄入调节系统——Fur(Ferric Uptake Regulation)系统

3.1.3弧菌铁载体相关基因的研究

3.2材料方法

3.3结果与分析

3.3.1用CAS法确定哈维氏弧菌H的产铁载体能力

3.3.2确定诱导铁代谢相关蛋白的条件

3.3.3哈维氏弧菌H外膜蛋白的提取

3.3.4哈维氏弧菌H的铁代谢相关外膜蛋白的飞行时间质谱分析

3.3.5哈维氏弧菌H铁调节蛋白基因

3.4讨论

第4章海洋放线菌对弧菌生物膜的影响

4.1前言

4.1.1细菌生物膜

4.1.2细菌生物膜对人类社会的危害

4.1.3细菌生物膜与抗生素耐药

4.1.4关于弧菌生物膜的研究

4.1.5细菌生物膜的形成与铁的关系

4.1.6细菌生物膜的防治

4.2材料方法

4.3结果与分析

4.3.1弧菌生物膜的形成条件及研究模型建立

4.3.2海洋放线菌发酵液对弧菌细菌生物膜产生的抑制

4.3.3海洋放线菌发酵液对弧菌细菌生物膜的降解

4.4讨论

结论

参考文献

附录

在读期间发表的论文与会议摘要

特别致谢

致谢

原创性声明