一、利用siRNA抑制HepG2和K562细胞cyclinD1表达对其生物学特性的影响;二、甲异靛抗肿瘤作用及机理的研究

摘要

背景：细胞周期素D1(CD1)是调控细胞周期的重要分子。CD1在多数恶性肿瘤细胞中高表达，是影响肿瘤预后的独立因素，因此CD1可能成为抗肿瘤治疗的靶点。RNA干扰因为对目的基因抑制作用的高效性和特异性，而受到人们的高度关注。本研究采用siRNA方法沉默肿瘤细胞中CD1的表达，并观察其相关生物学特性的改变。 方法：按照RNAi靶点原则，设计出可能对CD1有干扰作用的序列，体外合成发夹结构，并将其连接到含U6启动子的质粒PGE-1上。将质粒分别转染到HepG2和K562细胞中，利用RT-PCR筛选出对HepG2和K562细胞的CD1有抑制作用的重组质粒。观察HepG2和K562细胞中CD1表达抑制后，细胞周期的变化。筛选稳定转染质粒的细胞，并观察稳定转染PGE-siRNACD1(可抑制HepG2和K562细胞中CD1表达的重组质粒)后，HepG2和K562细胞中CD1在mRNA和蛋白水平上的表达。观察HepG2和K562细胞稳定转染PGE-siRNACD1后细胞生长情况的改变，对Vp16敏感性和Vp16诱导细胞凋亡情况的变化。 结果：设计出4个可能干扰序列，按照PGE-1质粒的要求将其连接到PGE-1，转染细胞后发现，含片段1命名为(PGE-siRNACD1)重组质粒可明显抑制HepG2和K562细胞表达CD1，可增加G1期细胞的比例。HepG2和K562细胞稳定转染PGE-siRNACD1后，CD1mRNA和蛋白水平表达均明显降低，HepG2和K562细胞CD1表达降低后，其细胞增殖速度亦明显减慢；PGE-siRNACD1的稳定转染提高HepG2和K562细胞加对Vp16的敏感性，增加Vp16诱导HepG2和K562细胞凋亡。 结论：利用PGE-1质粒可构建抑制HepG2和K562细胞表达CD1的质粒。HepG2和K562细胞CD1表达降低后，细胞增殖减慢，提高对Vp16敏感性。

目录

第一部分利用siRNA抑制Hepg2和K562细胞cyclinD1表达对其生物学特性影响的研究

缩略词

摘要

前言

材料与方法

结果

讨论

小结

参考文献

第二部分甲异靛抗肿瘤作用及机理的研究

缩略词

摘要

前言

第一章甲异靛抗白血病及机制研究

材料与方法

结果

第二章甲异靛抗实体瘤作用的体内外研究

材料与方法

结果

讨论

小结

参考文献

个人简历

致谢