血管紧张素转换酶、血管紧张素原、内皮型一氧化氮合酶和载脂蛋白E基因多态性与冠心病的相关性研究

摘要

1.血管紧张素转换酶(ACE)、血管紧张素原(AGT)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和载脂蛋白E(ApoE)基因多态性与冠心病相关性研究的国内外现状 冠心病是当今中国患病率和死亡率极高的主要公共健康问题，探讨冠心病的危险因素，对于其预防和治疗有重要意义。冠心病公认的危险因素有高血压、高脂血症、糖尿病、吸烟，但近年来发现某些人群没有这些危险因素也有早发冠心病的倾向。越来越多的证据表明冠心病是多因素和多基因疾病，不同人群的易感性不同，流行病学及遗传病学研究表明遗传与环境因素共同参与了冠心病的发病。然而对于绝大多数患者，其冠心病发病的分子生物学基础仍不清楚。普遍认为当遗传和环境因素作用累积到一定程度，最终导致基因表达异常及冠心病的发病。 过去十年来，对冠心病候选基因的研究引起了人们极大的兴趣。近来，肾素血管紧张素系统基因被认为与冠心病相关，这些基因的多态性开始为人们所认识。有报道血管紧张素转换酶基因和血管紧张素原基因与冠心病的发生发展相关。 内皮细胞最重要的产物是一氧化氮，是内皮细胞通过精氨酸由内皮型一氧化氮合酶合成的内皮依赖性血管扩张的重要介质。一氧化氮可抑制血小板聚集、血管平滑肌细胞的增殖、白细胞对内皮细胞的黏附、血管平滑肌细胞的迁移和生长和致动脉粥样硬化的低密度脂蛋白的氧化。内皮型一氧化氮合酶基因G894T突变可影响eNOS酶的功能和活性，从而参与冠心病的发生发展。 载脂蛋白E在胆固醇和甘油三酯的代谢中起关键作用，研究表明由于ApoE基因遗传具有多态性，即等位基因E2、E3、E4的点突变，可影响脂蛋白代谢和血脂水平，促使动脉粥样硬化形成冠心病。一些研究表明E4等位基因携带者冠心病的危险性增加。然而也有研究显示冠心病患者E4等位基因频率无显著性差异甚至降低。 到目前为止，有关ACE，AGT，eNOSandApoE基因多态性与冠心病的相关性以及多种基因在冠心病发病中相互关系的研究结论不一。 2.研究目的 本研究目的是：1.应用基因芯片技术，评估ACE、AGT、eNOS和ApoE基因多态性与冠心病的关系。2.分析这四种候选基因多态性在冠心病的发生和发展中是否存在协同作用。3.为冠心病的药物治疗提供理论根据。 3.资料与方法 3.1资料 3.1.1一般资料 佛山地区冠心病患者133人，选自2004年8月-2005年5月住院病例，符合1979年世界卫生组织关于缺血性心肌病的命名和诊断标准。年龄为64±8岁。男性100例，女性33例，其中心肌梗死65例，，不稳定型心绞痛68例，全部病例行冠脉造影术确诊。对照者154人：健康体检者、疑似冠心病人冠脉造影正常者，并除外心血管疾病和糖尿病家族史者。男116名、女38名，年龄为63±8岁。病例组和对照组均为南方汉族人。 3.1.2病例组和对照组冠心病危险因素的比较： 入院后空腹12小时于次日早晨采空腹血检测ACEI/D、AGTM235T、eNOS894T和ApoE基因多态性、空腹血糖、肝肾功能、血总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇和甘油三酯水平。测量血压、身高、体重。比较两组冠心病的危险因素，两组年龄和性别构成均无统计学意义，表明两组具有可比性。 3.2实验方法 3.2.1基因分析 从外周血的白细胞中提取基因组脱氧核糖核酸。应用聚合酶链反应扩增ACE、AGT、eNOS和ApoE基因的特异片段，然后使用基因芯片检测出ACE、AGT和eNOS和ApoE基因的多态性位点。 3.2.2统计学方法 采用SPSS11.0软件包作统计学处理，计量资料以均数±标准差表示，采用基因计数法计算各组病例及对照组的ACE、AGT、eNOS和ApoE基因型和等位基因频率。根据资料要求采用χ2检验、t检验或方差分析。对冠心病的危险因素进行多因素Logistic回归分析。P＜0.05认为有统计学意义。 4.结果 4.1ACE、AGT、eNOS和ApoE基因多态性检测： 4.1.1冠心病组及对照组的基因型频率适合度检测，显示皆达到Hardy-Weinberg平衡。 4.1.2冠心病组ACE基因型：ACEDD基因型频率与对照组相比有显著性差异，28.57％Vs15.58％，χ2=7.107，P＜0.01，DD基因型与冠心病明显相关，0R=2.167，95％CI=1.219-3.852，两组D等位基因频率有显著性差异，0.49vs0.35，χ2=5.200，P＜0.05。 4.1.3冠心病组AGT基因型：AGTTT基因型频率与对照组相比有显著性差异，75.94％vs54.55％，χ2=14.259，P＜0.001，TT基因型与冠心病明显相关，0R=2.630，95％CI=1.582-4.374，两组T等位基因频率有显著性差异，0.87Vs0.74，χ2=6.755，P＜0.01。 4.1.4冠心病组eNOS基因型：eNOS-TT基因型频率与对照组相比有显著性差异，5.27％vs0.65％，χ2=4.033，P＜0.05，TT基因型与冠心病明显相关，OR=8.500，95％CI=1.032-70.006，两组T等位基因频率无显著性差异，0.10Vs0.08，χ2=0.148，P＞0.05。 4.1.5本组冠心病ApoE基因型：E2/E2，E2/E3，E2/E4，E3/E3，E3/E4，E4/E4基因型频率分别为1.50％，22.5％，3.0％，61.65％，9.77％，1.50％，与对照组0％，18.83％，1.30％，64.29％，13.64％，1.95％相比无显著性差异，P＞0.05。E2、E3和E4等位基因频率分别为0.14，0.78，0.08，对照组为0.10，0.81，0.08。两组E2、E3和E4等位基因频率无显著性差异，P＞0.05。 4.1.6冠心病组ApoEE2/E2，E2/E3，E2/E4，E3/E3，E3/E4，E4/E4基因型的血脂水平经统计学检验无显著性差异，P＞0.05。 4.2冠心病组ACE、AGT、eNOS和ApoE基因型的联合检测： 4.2.1ACEDD和AGTTT基因型联合增加冠心病的危险性，P＜0.01，χ2=11.759，0R=3.467，95％CI=1.651-7.277。4.2.2ACEDD和eNOSTT基因型联合并未显示增加冠心病的危险性，P＞0.05，χ2=0.016，OR=2.336，95％CI=0.209-26.054。 4.2.3ACEDD和ApoEE3/E4+E4/E4基因型联合并未显示增加冠心病的危险性，P＞0.05，χ2=0.000，0R=1.162，95％CI=0.230-5.854。 4.2.4AGTTT和eNOSTT基因型联合增加冠心病的危险性，P＜0.01，χ2=7.096，0R=1.047，95％CI=1.009-1.087。 4.2.5AGTTT和ApoEE3/E4+E4/E4基因型联合并未显示增加冠心病的危险性，P＞0.05，χ2=2.207，0R=1.977，95％CI：0.793-4.928。 4.2.6eNOSTT和ApoEE3/E4+E4/E4基因型联合并未显示增加冠心病的危险性，P＞0.05，χ2=0.546，OR=0.284，95％CI：0.031-2.574。 4.3ACEI/D、AGTM235T、eNOS894T和ApoE基因多态性与冠心病患者冠状动脉狭窄程度的相关性 4.3.1ACEDD和AGTTT基因型与冠心病患者冠状动脉狭窄程度明显相关(t=2.581，P＜0.05)、(t=2.602，P＜0.05)。 4.3.2eNOSTT和ApoEE4基因型与冠心病患者冠状动脉狭窄程度无相关性(t=1.719，P＞0.05)、(t=0.330，P＞0.05)。 4.4多因素Logistic回归分析 AGTTT基因型(P＜0.05，OR=1.976，95％CI：1.048-3.726)、高胆固醇血症(P＜0.05，OR=2.155，95％CI：1.133-4.098)、吸烟(P＜0.001，OR=5.974，95％CI：3.036-11.758)和高血压(P＜0.001，OR=11.579，95％CI：6.170-21.729)，可能是中国人冠心病的独立危险因素。ACE、eNOS和ApoE基因多态性可能不是中国人冠心病的独立危险因素。 5.结论 5.1AGT基因多态性可能是中国南方汉族人冠心病的独立危险因素，有可能作为冠心病形成的筛选指标以早期发现高危者。 5.2ACE、eNOS和ApoE基因可能不是中国南方汉族人冠心病的独立危险因素。5.3ACEDD和AGTTT基因型/AGTTT和eNOSTT基因型联合增加中国南方汉族人冠心病的危险性。 5.4ACEDD和AGTTT基因型与中国南方汉族人冠心病的严重程度相关。 5.5eNOS和ApoE基因多态性与中国南方汉族人冠心病的严重程度无相关。 5.6ApoE基因多态性与中国南方汉族人冠心病患者的血脂水平无相关。 5.7基因芯片技术为临床提供了一种快速、准确地筛选冠心病易感基因的方法。

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结果

讨论

结论

参考文献

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