应用组织芯片技术和免疫组化方法筛选鼻咽癌预后相关分子标记物

摘要

背景与目的：鼻咽癌是我国华南地区最常见的恶性肿瘤之一，流行病学调查和病因学研究显示，其发病与环境、遗传、EB病毒感染等因素的作用密切相关。肿瘤局部复发和远处转移是导致治疗失败的首要原因。目前临床使用的传统临床分期用于判定鼻咽癌患者预后存在一定不足，具有相同临床分期的鼻咽癌患者，预后有明显差异。因此，寻找有效的鼻咽癌分子标记物来预测患者预后对鼻咽癌的治疗意义重大。 材料与方法：选取中山大学肿瘤防治中心病理科1990-2002年期间有相应临床随访资料的鼻咽癌组织标本280例，构建成4张鼻咽癌组织芯片，用免疫组织化学方法分别检测p53、LMP-1、Survivin、VEGF、CD147、LYVE-1和CD31等分子标记物在鼻咽癌组织中的表达，分析上述分子标记物的表达与鼻咽癌临床病理变化和患者预后的关系。 结果：1.鼻咽癌组织各分子标记物表达与临床病理变化及预后的关系(1)p53阳性表达率为94/247(38.06％)，鼻咽癌组织p53的表达与患者性别、年龄、TNM分期、T分期、淋巴结转移、复发及远处转移无关(P＞0.05)；p53在鼻咽癌组织中表达阴性组和阳性组患者5年总生存率分别为56.20％及58.85％，生存率没有显著性差异(P=0.8071)。 (2)LMP-1阳性表达率为130/200(65％)，LMP-1在鼻咽癌组织中的表达与淋巴结转移正相关(P＜0.05)；与患者性别、年龄、TNM分期、T分期、复发及远处转移无关(P＞0.05)；鼻咽癌组织LMP-1表达阴性组和阳性组患者5年总生存率分别为56.62％和56.13％，无显著性差异。 (3)Survivin阳性表达率为108/206(52.43％)，鼻咽癌组织Survivin的表达与原发灶的侵犯范围、TNM分期及淋巴结转移正相关(P＜0.05)，与患者性别、年龄、局部复发和远处转移无关(P＞0.05)；鼻咽癌组织Survivin表达阴性和阳性组患者5年总生存率分别为70.54％和42.32％，总生存率差异显著(P=0.0006)；晚期患者鼻咽癌组织Survivin表达阴性和阳性组5年总生存率分别为73.41％和36.51％，总生存率差异显著(P=0.0002)。 (4)VEGF阳性表达率为86/188(45.74％)，鼻咽癌组织VEGF的表达与TNM分期、复发及远处转移正相关(P＜0.05)，与患者的性别、年龄、T分期及淋巴结转移无关(P＞0.05)；鼻咽癌组织VEGF表达阴性和阳性组患者5年总生存率分别为67.75％和40.11％，总生存率差异显著(P=0.0028)；晚期患者鼻咽癌组织中VEGF表达阴性和阳性组5年总生存率分别为65.22％和35.03％，总生存率差异显著(P=0.0025)。 (5)鼻咽癌组织中存在Survivin与VEGF协同表达的104例标本，两者表达同为阳性患者5年生存率为18.22％，同为阴性患者5年生存率为73.54％，Survivin与VEGF表达同为阳性的鼻咽癌患者总生存显著低于同为阴性患者(P=0.0003)。 (6)CD147阳性表达率为121/204(59.31％)，CD147在鼻咽癌组织中的表达与远处转移正相关(P＜0.05)，与性别、年龄、TNM分期、肿瘤原发灶侵犯范围、有无淋巴结转移及局部复发无关(P＞0.05)；鼻咽癌组织中CD147表达阴性组和阳性组患者5年总生存率分别为66.08％及45.20％，差异显著(P=0.0009)。 (7)LYVE-1的高表达率为87/185(47.03％)，鼻咽癌组织中LYVE-1的表达与肿瘤局部复发正相关(P＜0.05)，与性别、年龄、TNM分期、鼻咽癌原发灶的侵犯范围、淋巴结转移以及远处转移无关(P＞0.05)；LYVE-1高表达组患者5年生存率为47.89％，低表达组5年生存率为65.17％，差异显著(P=0.0231)。 (8)鼻咽癌组织微血管密度(MVD)(-χ)±s=31.38±14.51，肿瘤组织中MVD与肿瘤复发及远处转移存在相关性(P＜0.05)，与患者性别、年龄、TNM分期、肿瘤原发灶侵犯范围、淋巴结转移无关(P＞0.05)。鼻咽癌组织MVD＞32(均数)组患者5年生存率为42.32％，MVD=32组5年生存率为61.03％，差异显著(P=0.0022)。 2.各分子指标在鼻咽癌中表达的相关性(1)Survivin与LMP-1在鼻咽癌组织中的表达正相关(r=0.256，P=0.004)；而p53和LMP-1，p53和Survivin的表达之间没有相关性(P＞0.05)。 (2)Survivin与VEGF在鼻咽癌组织中的表达正相关(r=0.265，P=0.002)；LYVE-1和VEGF表达正相关(r=0.45，P=0.001)。CD147与VEGF，CD147与MVD之间的表达都没有相关性(P＞0.05)。 (3)Cox回归模型分析结果提示TNM分期及蛋白VEGF、CD147、LYVE-1表达均是鼻咽癌独立的预后因子，TNM分期晚及蛋白VEGF、CD147、LYVE-1高水平表达患者预后较差，P值分别为0.012、0.021、0.000和0.023。 结论：1.组织芯片技术具有体积小、信息含量大等优点，是病理学研究高效快速的工具。 2.p53在鼻咽癌组织的表达与性别、年龄、临床分期、复发、远处转移及预后无关；LMP-1高表达者更易发生淋巴结转移；Survivin高表达与临床分期、T分期及淋巴结转移正相关，是鼻咽癌患者尤其是晚期患者预后不良指标。 3.VEGF在鼻咽癌的高表达与TNM分期、复发及远处转移有关；CD147高表达患者更易远处转移；LYVE-1高表达患者更易复发；MVD与肿瘤复发和远处转移正相关；VEGF、CD147、LYVE-1高表达和高MVD是鼻咽癌预后不良的指标，VEGF和Survvin表达协同分析将提高鼻咽癌患者预后判断价值。 4.TNM分期晚及蛋白VEGF、CD147、LYVE-1的高水平表达均可作为判定鼻咽癌患者预后不良的独立因素。

目录

文摘

英文文摘

第1章引言

第2章材料与方法

第3章结果

第4章讨论

结论

参考文献

缩略词

致谢

论文原创性声明