子宫内膜HOXA10，LIF表达水平与体外受精-胚胎移植妊娠结局的关系

摘要

随着体外受精-胚胎移植(IVF-ET)技术的发展，在促排卵、卵子的采集、受精和胚胎培养与移植方面取得了很大进步，胚胎质量也显著提高。目前胚胎质量已经有了很大的提高，对胚胎质量的评估也相对完善。 随着分子生物学技术的发展，对内膜功能状态的了解大大提高，已经发现了与子宫内膜容受性有关的一些因子。HOXA10和LIF是在生殖医学领域受到大家关注较多的两个因子。 LIF 是一种分泌型糖蛋白，是一种多功能的细胞因子，可以促进体内多种器官中细胞的生长、发育、分化等活动，而这些活动又与胚胎的着床和发育有关。1992年Steward等用基因敲除实验证明，LIF是小鼠胚胎着床的必要因子。从此，LIF在胚胎着床中的作用引起了人们的关注。许多研究发现LlF mRNA的表达，在哺乳动物的着床期明显升高。在人类，最早人们在正常可生育妇女、原因不明性不孕妇女的子宫内膜活组织检查发现：正常可生育妇女在分泌中期子宫内膜中LIF浓度明显高于原因不明性不孕妇女。随后，对原因不明性不孕妇女和继发性不孕妇女黄体中期子宫内膜LIF基因表达的测定发现，前者明显低于后者。人们推测LIF可能影响胚胎的着床和发育。但是，最近又有报道称，宫腔液中LIF浓度较低的妇女，人工授精或试管婴儿的成功率高。 LIF对胚胎着床过程起着重要调节作用，关于其调节为正性调节还是负性调节，尚存在争议；IVF-ET时不同个体分泌中期子宫内膜中LIF mRNA表达水平的差异是否与妊娠结局相关、相关关系如何等问题仍有待探讨。 HOXAlO基因是同源异型基因的一种，mRNA全长2691bp，编码785个氨基酸。其表达产物是一种转录因子。在小鼠，HOXA10为胚胎着床所必需：用基因敲除技术研究发现，HOXA10(-/-)小鼠可以存活，但表现为不孕，能正常排卵受精，但胚泡不能着床或植入后不久即被吸收。在人类，不明原因不孕妇女的子宫内膜中HOXA10的表达量明显降低；子宫内膜异位症患者腔上皮、腺上皮HOXA10表达正常，但间质细胞HOXA10表达明显下降：多囊卵巢综合征(PCOS)患者子宫内膜HOXA10 mRNA表达减少。研究发现，HOXA10基因参与调节子宫内膜间质细胞及腺上皮细胞周期性的增殖和分化，从而使子宫内膜进入容受状态，并参与子宫内膜的蜕膜化和妊娠的维持。 HoxA1基因是影响子宫内膜容受性的重要因素。目前国内关于HOXA10基因与子宫内膜容受性相关性的研究尚少，对IVF-ET病人的前瞻性研究未见报道。 本研究选择即将进入IVF/ICSI-ET周期的患者，于前一周期的分泌期留取子宫内膜，利用免疫组化技术和RT-PCR技术检测LIF和HOXA10的表达水平，探讨它们与IVF/ICSI-ET妊娠结局的关系。 研究内容与方法 1.研究对象选择2006年4月至2006年12月于我生殖中心进行IVF/ICSI-ET的患者59例，平均年龄为32.22±3.97(24～39)岁，平均不孕年限为5.46±3.40(1-13)年。不孕原因为单纯输卵管因素(30例)，单纯男方因素(15例)，输卵管因素合并男方因素(14例)。患者月经规律，月经周期24～35d，基础内分泌正常，妇科B超检查初步排除子宫畸形、子宫肿瘤及子宫内膜异位囊肿，致畸四项检查正常，近3个月内未使用激素类药。 2.实验方法 2.1 病理检查组织的石蜡包埋、切片，HE染色及读片由有经验的病理科医师完成，按Noyes标准区分子宫内膜周期。 2.2 SABC法免疫组化检测LIF的表达2.3 半定量RT-PCR检测子宫内膜中HOXA10mRNA和LIF mRNA的表达结果1．病理切片HE染色子宫内膜分期59例患者中，子宫内膜分期为分泌中期的有43例，分泌早期的有16例。进行LIF mRNA和HOXA10 mRNA的半定量RT-PCR检测的56例患者中，子宫内膜分期为分泌中期的有40例，分泌早期的有16例。 2．子宫内膜LIF免疫组化检测结果2.1 LIF在子宫内膜腺上皮、腔上皮、问质表达水平的比较腺上皮细胞、腔上皮细胞、间质细胞LlF表达水平分别为26.34±11.58、20.50±8.88、8.35±6.77，两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。 2.2妊娠组与未妊娠组子宫内膜LIF表达水平的比较子宫内膜为分泌中期的43例患者，腺上皮LIF表达水平在妊娠组与未妊娠组分别为25.69±12.92和26.60±11.00，两组相比差异无统计学意义(P>0.05)；腔上皮LIF表达水平在妊娠组与未妊娠组分别为21.14±9.63和19.18±7.98，两组相比差异有统计学意义(P<0.05)，妊娠组高于未妊娠组；间质LIF表达水平在妊娠组与未妊娠组分别为9.62±7.71和8.07±5.89，两组相比差异有统计学意义(P<0.05)，妊娠组高于未妊娠组。 子宫内膜为分泌早期的16例患者，腺上皮LIF表达水平在妊娠组与未妊娠组分别为24.96±10.88和27.26±11.27，两组相比差异无统计学意义(P>0.05)；腔上皮LIF表达水平在妊娠组与未妊娠组分别为20.19±7.97和20.98±8.48，两组相比差异无统计学意义(P>0.05)；间质LIF表达水平在妊娠组与未妊娠组分别为7.78±7.25和7.43±6.95，两组相比差异无统计学意义(P>0.05)。 3.子宫内膜LIFiRNA检测结果 3.1 妊娠组与未妊娠组子宫内膜LIF mRNA水平的比较子宫内膜为分泌早期或分泌中期的所有患者，妊娠组与未妊娠组子宫内膜LIF mRNA水平分别为1.06±0.31和0.92±0.15，两组比较差异有统计学意义(P<0.05)，妊娠组高于未妊娠组；子宫内膜为分泌早期患者，妊娠组与未妊娠组子宫内膜LIF mRNA水平分别为0.88±0.19和0.86±0.15，两组比较差异无统计学意义(P>0.05)：子宫内膜为分泌中期患者，妊娠组与未妊娠组子宫内膜LIFmRNA水平分别为1.12±0.32和0.94±0.14，两组比较差异有统计学意义(P<0.05)，妊娠组高于未妊娠组。 3.2 分泌早期与分泌中期子宫内膜LIF mRNA水平的比较16例分泌早期与40例分泌中期子宫内膜LIF mRNA水平分别为0.87±0.15和1.01±0.24，两者比较差异有统计学意义(P<0.05)，分泌中期高于分泌早期； 其中妊娠组中，分泌早期与分泌中期子宫内膜LIF mRNA水平分别为0.88±0.19和1.12±0.32，两者比较差异无统计学意义(P>0.05)；未妊娠组中，分泌早期与分泌中期子宫内膜LIF mRNA水平分别为0.86±0.15和0.94±0.14，两者比较差异无统计学意义(P>0.05)。 3.3 不同不孕原因患者子宫内膜LIF mRNA水平的比较男方因素不孕和输卵管因素不孕(单纯输卵管因素不孕/输卵管因素合并男方因素不孕)患者子宫内膜LIF mRNA水平分别为0.90±0.14和0.99±0.24，两者比较差异无统计学意义(P>0.05)。 4.子宫内膜HOXA10 mRNA检测结果 4.1 妊娠组与未妊娠组子宫内膜HOXA10 mRNA水平的比较子宫内膜为分泌早期或分泌中期的所有患者，妊娠组与未妊娠组子宫内膜HOXA10 mRNA水平分别为0.69±0.13和0.62±0.06，两组比较差异有统计学意义(P<0.05)，妊娠组高于未妊娠组；子宫内膜分期为分泌早期患者，妊娠组与未妊娠组子宫内膜HOXA10 mRNA水平分别为0.73±0.16和0.62±0.05，两组比较差异无统计学意义(P>0.05)；子宫内膜分期为分泌中期患者，妊娠组与未妊娠组子宫内膜HOXA10 mRNA水平分别为0.68±0.12和0.62±0.07，两组比较差异有统计学意义(P<0.05)，妊娠组高于未妊娠组。 4.2 分泌早期与分泌中期子宫内膜HOXAl0 mRNA水平的比较16例分泌早期与40例分泌中期子宫内膜HOXA10 mRNA水平分别为0.66±0.10和0.64±0.10，两者比较差异无统计学意义(P>0.05)；其中妊娠组中，分泌早期与分泌中期子宫内膜HOXA10 mRNA水平分别为0.734±0.16和0.68±0.12，两者比较差异无统计学意义(P>0.05)；未妊娠组中，分泌早期与分泌中期子宫内膜LIF mRNA水平分别为0.62±0.05和0.62±0.07，两者比较差异无统计学意义(P>0.05)。 4.3 不同不孕原因患者子宫内膜HOXA10 mRNA水平的比较男方因素不孕和输卵管因素不孕(单纯输卵管因素不孕/输卵管因素合并男方因素不孕)患者子宫内膜HOXA10 mRNA水平分别为0.65±0.08和0.65±0.10，两者比较差异无统计学意义(P>0.05)。 结论 1. 白血病抑制因子在子宫内膜的表达存在时空特异性。 2. 白血病抑制因子与子宫内膜容受性有关，妊娠组分泌中期子宫内膜白血病抑制因子表达水平显著高于未妊娠组，推测其水平高可能表示子宫内膜容受性好。 3.HOXA10基因与子宫内膜容受性有关，妊娠组分泌中期子宫内膜HOXA10基因表达水平显著高于未妊娠组，推测其水平高可能表示子宫内膜容受性好。 4.缺乏分泌中期的HOXA10 mRNA的表达高峰，可能是导致不孕、引起着床障碍的原因之一。

目录

文摘

英文文摘

第1章前 言

第2章材料与方法

第3章结 果

第4章讨论

第5章本研究的局限性及展望

第6章结论

参考文献

附 图

主要英文缩略词

致谢

原创性声明

在读期间撰写的论文