重组人胸腺肽α1在大鼠体内的药动学及对药物代谢酶的影响研究

摘要

本研究通过采用放射性同位素标记、Cocktail探针药物结合现代色谱技术、以及分子生物学技术、酶活性分析等现代药理学方法，较系统地研究了rhTα1药物动力学特征和对主要药物代谢酶的影响。 第一部分rhTα1在大鼠体内的药动学研究。 目的：掌握大鼠皮下注射rhTα1的吸收、分布、排泄等药动学特征，为rhTα1的临床试验和给药方案设计提供参考。 方法：建立<'125>I同位素标记示踪和TCA沉淀蛋白相结合的方法，测定rhTα1单次给药后血药浓度．时间数据、计算药动学参数、生物利用度，测定血浆蛋白结合率、不同时间段组织药物含量，不同时间段尿、粪、胆汁的药物含量。 结果：(1)大鼠皮下注射rhTα1150、300和600μg/kg后，三个剂量的消除相半衰期(t<,1/2ke>)范围为5.33～6.47h，平均606h；平均清除率为0.05 L/kg/h；T<,peak>均值为1.0h；C<,max>为316.20、591.91、1302.92ng/mL；AUC<,0-24h)分别为2891.11、4584.26和12150.30h·ng/mL，C<,max>和AUC<,(0-24h)>均与剂量呈正相关。(2)大鼠皮下注射rhTα1的绝对生物利用度为94.9﹪。(3)rhTα1与血浆蛋白平均结合率为10.7﹪。(4)大鼠皮下注射rhTα1后，绝大多数组织含药量均于给药后1h达到最高，在以后时间内含药量逐渐下降。大部分时间点以肾脏含药量最高，脑组织含量最低。(5)大鼠皮下注射rhTα1后，在120h内有82.6﹪放射性从尿中回收，7.6﹪从粪中回收，提示该药主要经肾由尿排泄。 结论：大鼠皮下注射rhTα1后的药物消除符合一房室模型，呈线性动力学特征；表现出较快和良好的吸收，皮下注射rhTα1的绝对生物利用度较高，血浆蛋白结合率较低，在组织内广泛分布并能较快地消除，大部分时间以肾脏含药量最高，该药主要经肾由尿排泄。 第二部分rhTα1对大鼠肝微粒体细胞色素酶P450活性的影响。 目的：研究rhTα1对大鼠肝细胞色素P450酶活性的影响，以评价rhTα1对肝脏细胞色素P450是否有抑制或诱导效应，为指导临床合理联合用药提供实验依据。 方法：分别采用rhTα1体外与大鼠肝微粒体直接孵育，以及大鼠连续14天皮下注射rhTα1 150、300和600μg/kg，然后采用Cocktail探针法检测各组的CYP450活性。 结果：rhTα1体内连续给药14天后，对大鼠肝细胞色素P450同工酶(CYP1A2、CYP2D2、CYP2E1、CYP3A1、CYP2C6、CYP2C11)活性均具有不同程度的影响作用。对CYP1A2、CYP2D2、CYP3A1、CYP2C6、和CYP2C11的活性有剂量依赖性的增强作用，随着剂量的升高，这些CYP450酶亚型的活性也逐渐提高。600μg/Kg剂量对CYP2E1、2D2、3A1、1A2的活性具有显著增强作用，P<0.05～0.01：15～600μg/kg剂量对CYP1E1各剂量组均有显著诱导作用；对2C6、2C11的活性也有提高作用，但与空白对照组相比差异无统计学意义；rhTα1体外与微粒体直接温孵，对CYP1A2、CYP2D2、CYP3A1、CYP2C6、CYP2C11活性无明显影响，在20μmol/l、50μmol/l这两个高浓度下对CYP2E1可产生显著的抑制作用。 结论：rhTα1在150～600μg/kg剂量范围内连续给药14天，对CYP450同工酶的活性表现出不同程度的增强作用，说明rhTα1可通过药物代谢酶系统影响其他药物的代谢。 第三部分rhTal对大鼠肝微粒体细胞色素P450酶基因和蛋白表达的影响。 目的：考察rhTal对大鼠肝微粒体细胞色素P450酶基因和蛋白表达的影响，初步探讨rhTal影响CYP450酶活性的机制。 方法：大鼠连续14天皮下注射rhTα1 150、300和600μg/kg，取肝组织，制备肝微粒体和提取总RNA，分别应用反转录．聚合酶链式反应(RT-PCR)和免疫印迹杂交(Westernblot)法，检测CYP3A1、CYPlA2、CYP2E1几种亚型的mRNA和蛋白的表达。 结果：与空白对照组相比，rhTα1 CYP3A1、CYP1A2基因的rnRNA表达明显增加，CYP3A1、CYPlA2、CYP2E1几种亚型的蛋白表达明显增加。 结论： rhTα1在诱导CYP450酶活性的同时，相应同工酶的mRNA和蛋白表达水平也明显增加，提示rhTα1对CYP450有关亚型有整体的诱导作用。 第四部分rhTα1对大鼠肝、肾微粒体一氧化氮生成的影响。 目的：考察rhTα1对一氧化氮(NO)生成途径的影响，研究根据胸腺肽诱生细胞因子的机制，是否会影响rhTα1对CYP450酶的诱导作用结果。 方法：大鼠连续14天皮下注射rhTα1 150、300和600μg/kg，分别取肝、肾，制备肝微粒体和肾微粒体，分别测定大鼠肝、肾微粒体中NOS活性，以及NO生成量。 结果：rhTal连续给药14天，对肝、肾微粒体NOS活性以及NO生成量无明显影响，不同剂量组与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。 结论：胸腺肽诱生细胞因子的机制，在本实验剂量下对NO生成途径没有影响，不会影响rhTα1对CYP450酶的诱导作用。 第五部分rhTα1对大鼠Ⅱ相代谢酶活性的影响。 目的：考察rhTα1对谷胱甘肽-S-转移酶(GSTs)、尿苷-5’-二磷酸葡糖醛酰转移酶(UGTs)这两个Ⅱ相代谢酶活性的影响。 方法：大鼠连续14天皮下注射rhTα1 150、300和600μg/kg，分别取肝、肾，制备肝微粒体和肾微粒体，分别测定大鼠肝。肾微粒体中GSTs、UGTs活性。 结果：与空白对照组比较，rhTα1在中、高剂量下对肝微粒体GSTs的抑制作用有显著意义(P<0.05～0.01)，对肾微粒体GSTs活性无显著影响(P>0.05)；rhTα1对肝脏GSTs的抑制作用，在治疗肝病、肿瘤等疾病时，对于逆转化学药物耐药性的产生，具有重要的临床价值和意义。rhTα1对大鼠肝UGTs活性无明显影响，对肾微粒体UGTs活性呈现出诱导作用，与空白对照组比较，高剂量下有显著差异(P<0.05)；rhTα1对肾微粒体UGTs表现出的活性诱导作用可能与其化疗保护、减轻药物毒性有关。 结论：rhTα1对肝、肾Ⅱ相代谢酶的活性有不同程度的影响，对GSTs、UGTs等Ⅱ相代谢酶的影响有一定的组织选择性，这可能与其对这些Ⅱ相代谢酶同工酶的选择性作用有关。

目录

文摘

英文文摘

前 言

第一部分rhTα1在大鼠体内的药动学研究

材料和方法

结果

讨论

小结

附表与附图

第二部分rhTα1对大鼠肝微粒体细胞色素酶P450活性的影响

材料和方法

结果

讨论

小结

附表与附图

第三部分rhTα1对大鼠肝微粒体细胞色素P450酶基因和蛋白表达的影响

材料和方法

结果

讨论

小结

附表与附图

第四部分rhTα1对大鼠肝、肾微粒体一氧化氮生成的影响

材料和方法

结果

讨论

小结

附表与附图

第五部分rhTα1对大鼠Ⅱ相代谢酶的影响

材料和方法

结果

讨论

小结

附表与附图

结论

创新与意义

展 望

参考文献

缩略词表

致 谢

原创性声明