错配修复基因hMLH1启动子甲基化对子宫内膜癌发生的影响

摘要

研究目的： 子宫内膜癌为女性生殖器三大恶性肿瘤之一，其高发年龄为58～61岁，约占女性生殖道恶性肿瘤的20﹪～30﹪，近几年发病率有上升趋势，主要考虑与肥胖、高血压、糖尿病、绝经期延迟，及各种原因导致的子宫内膜只受雌激素的长期刺激，而又无孕激素的拮抗有关。 随着分子生物学的发展，现代肿瘤学理论认为肿瘤的发生发展是一个多基因参与的多阶段过程，这些因素最终在不同阶段作用于不同基因，引起相关基因的结构及表达水平改变，导致癌症的发生发展。抑癌基因功能的丢失可能通过多种途径，目前普遍认为DNA异常甲基化改变是除缺失与突变之外导致抑癌基因表达失活的第3种机制，在肿瘤的发生发展中起着不可忽视的作用。 MSP即methylation-specific PCR，是研究DNA甲基化最常用的方法，其机制是用亚硫酸氢盐修饰基因组DNA，使未甲基化的胞嘧啶转变为尿嘧啶，而已经甲基化的胞嘧啶则不变。然后针对甲基化和非甲基化的等位基因分别设计其各自特异性的引物，用这两对引物对同-DNA模板分别进行PCR扩增来检测基因的甲基化及非甲基化状态。如果应用甲基化特异性引物使基因片段扩增，提示该基因片段发生了甲基化；若应用非甲基化特异性引物使基因片段扩增，则提示该基因片段无甲基化。如果两对引物都可以使DNA片段扩增，说明该基因片段有部分甲基化。该方法灵敏度高，只需要很少的DNA。错配修复基因hMLH1位于染色体3P 21.3～23，全长2484bp，含2268 bp的开放读码框架，共19个外显子，编码756个氨基酸，是细胞内错配修复系统的重要组成基因，负责对碱基错配进行修复，它的缺陷可导致细胞突变频率的增加，由此有可能造成微卫星不稳定性、相关癌基因、抑癌基因突变的不断累积，导致细胞恶变，肿瘤形成。本试验从分子生物学水平上研究hMLH1基因在正常的增生期子宫内膜组织、子宫内膜癌组织中的甲基化情况，以及该基因所表达的蛋白在上述两种组织的石蜡切片中的表达情况，旨在探讨hMLH1基因的甲基化是否是子宫内膜癌的发病机制之一，可否作为子宫内膜癌基因治疗的靶点。 试验方法： 收集2004年3月～2006年10月在中山大学附属第一医院住院并且接受手术治疗的子宫内膜癌患者37例，同期因子宫肌瘤住院行全子宫切除患者的正常的增生期子宫内膜组织20例，新鲜的组织在离体后即放入液氮内保存。所取标本一部分用于提取DNA，另一部分用于做免疫组化试验。所取标本均为子宫内膜样腺癌。按FIGO(2000年)标准进行手术一病理分期，Ⅰ期20例，Ⅱ期9例，Ⅲ期6例，Ⅳ期2例。其中高分化有22例，中分化有13例，低分化有2例。患者年龄24-69岁，平均年龄49.4岁。患者术前均未行化疗、放疗、免疫、激素治疗等抗肿瘤治疗。提取DNA行MSP试验，检测hMLH1的甲基化情况；应用免疫组化链霉素抗生物素蛋白-过氧化酶染色法(S-P法)，检测hMLH1在子宫内膜癌及正常增生期子宫内膜组织的表达情况。试验结果采用SPSS11.0统计软件对所得数据进行分析。两种不同的组织标本进行比较，采用Chi-square检验或Fisher精确概率检验进行分析，用Spearman相关系数检测其相关性。检验水准α=0.05，以P<0.05认为差异有显著性． 结果： hMLH1基因在子宫内膜癌肿瘤组织中的甲基化率为43.2﹪(16/37)，在正常的子宫内膜组织中的甲基化率为15﹪(3/20)。在肿瘤组织中，hMLH1的甲基化率明显高于正常的子宫内膜组织，两者之间具有统计学意义(P<0.05)。 免疫组化的结果表明：hMLH1蛋白在子宫内膜癌肿瘤组织的表达率为51-3﹪(19/37)，在正常的增生期内膜组织表达率为80﹪(16/20)。两者之间具有统计学意义(P<0/05)。 其中子宫内膜癌组织中检测到的16例发生hMLH1甲基化的组织仅有2例表达(表达率12.5﹪)，未发生甲基化的21例中有17例表达(表达率80.9﹪)，两者之间具有统计学意义(P<0.05)。且两者之间呈负相关，相关系数为0.670。 正常子宫内膜组织中检测到的3例发生hMLH1甲基化的组织1例表达(表达率为33.3﹪)，未发生甲基化的17例中有16例表达(表达率94.1﹪)，两者之间具有统计学意义(P<0.05)。两者之间仍呈负相关，相关系数为0.028。 本试验中，通过分析甲基化与组织学类型、病理分级与分期、肌层浸润、淋巴结转移及宫颈浸润之间的关系，检测其P值均大于0.05，没有统计学意义。 结论： 错配修复基因hMLH1甲基化促进子宫内膜癌的发生。 错配修复基因hMLH1甲基化可能与肿瘤的浸润、远处转移等恶性行为无明显的关系。

目录

文摘

英文文摘

引 言

材料与方法

试验结果

讨 论

结 论

参考文献

中英文缩略词

致 谢

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