促性腺激素释放激素激动剂对乳腺癌细胞株生长及化疗敏感性的体外影响

摘要

本研究的目的：①探讨GnRHa不同浓度、不同作用时间对乳腺癌细胞增生、细胞周期、细胞迁移等生物学特性的影响。②在有雌激素和无雌激素条件下，GnRHa对乳腺癌细胞增生的影响，以及对ER α、GnRH-R、PCNA mRNA表达的影响。③GnHRa作用下，5-Fu和EPI对乳腺癌细胞抑制作用是否有影响，同时观察在GnRHa作用下乳腺癌细胞多药耐药基因(MDRl)表达变化。 第一章GnRHa对乳腺癌细胞株生长的影响 研究目的:探讨GnRHa不同浓度、不同作用时间对乳腺癌细胞增牛、细胞周期和细胞迁移的影响。 材料和方法: 乳腺癌细胞株MCF-7细胞(雌激素受体阳性)和MDA-MB-231(雌激素受体阴性)的培养条件为：PRMI-1640+10％胎牛血清(FBS)。将处于生长对数期的细胞按2000个／孔(100ul／孔)的浓度接种至96孔板，细胞贴壁后加入不同浓度的GnRHa(triptorelin)，每天换液。具体分组为：①对照组；②GnRHa(10-9mol／L)组：③GnRHa(10-8mol／L)组；④GnRHa(10-7mol／L)组；⑤GnRHa(10-6mol／L)组；⑥GnRHa(10-5mol/L)组。加入GnRHa时为O天，分别在1天、4天、7天分别应用CCK-8试剂盒进行细胞活性检测，450nm处的吸光度(A450)越高，表示细胞活性越高。将处于生长对数期的细胞按2000个／孔(100 ul／孔)的浓度接种至96孔板，分组为①对照组；②GnRHa(10-5mol／L)。分别在加药后不同时间(1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天)进行CCK-8检测细胞活性。每个分组设8个复孔，每个实验重复3次。 结论: ①不同浓度的GnRHa(10-9mol／L～10-5mol／L)对MCF-7细胞和MDA-MB-231增殖无影响； ②GnRtta(10-5mol／L)作用1天到7天对MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞的增殖无影响。 ③GnRHa(10-5mool／L)对MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞的细胞周期、细胞迁移无影响。 第二章两种雌激素条件下GnRHa对乳腺癌细胞生长及ER α、GnRH-R、PCNA mRNA表达的影响 研究目的:探讨在有雌激素和无雌激素两种条件下，GnRHa对乳腺癌细胞增生的影响，以及对ER α、GnRH-R、PCNA mRNA表达的影响。 材料和方法: 配制普通培养基(PRMI-1640+10％FBS)和无雌激素培养基(无酚红PRMI-1640+10％炭吸附胎牛血清CSFBS)。乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-231先在普通培养基中培养。将处于对数期的细胞按2000个／孔(100μ l／孔)的浓度接种至96孔板，用无雌激素培养基培养24小时后，分组加入不同的培养基和药物。分组为：①普通培养基组；②普通培养基+GnRHa组；⑨无雌激素培养基组；④无雌激素培养基+GnRHa组。其qaGnRHa浓度为10-5mol／L。每天更换培养基及药物。分别在分组加药后不同时间(2天、4天、6天)，进行CCK-8检测细胞活性。每个分组设8个复孔，每个实验重复3次。因此每个实验值代表24次检测的均数。 结论: ①在无雌激素培养基条件下，GnRHa不影响乳腺癌细胞株(MCF-7和MDA-MB-23 1)的增殖; ②在普通培养基和无雌激素培养基条件下，GnRHa都上调乳腺癌细胞株(MCF-7和MDA—MB-231)的GnRH-R mRNA表达； ③在普通培养基和无雌激素培养基两种条件下，GnRHa都下调MCF-7细胞的ER α mHNA表达； ④在无雌激素培养基， GnRHa使乳腺癌细胞株(MCF-7和MDA-MB-231)的PCNAmRNA表达增强；普通培养基中GnRHa使MDA-MB-231细胞PCNA mRNA表达增强，而MCF-7细胞的PCNA mRNA表达无改变。 第三章 GnRHa对乳腺癌细胞株化疗敏感性的影响 研究目的:探讨在GnHRa作用后，5-FU和EPI对乳腺癌细胞抑制作用是否有影响，同时观察在GnRHa作用下乳腺癌细胞多药耐药基因(MDRl)表达变化。 材料和方法: 乳腺癌细胞(MCF-7和MDA-MB-231)用GnRHa(10-5mol／L)(GnRHa组)处理4天，同时设立对照组。4天后，在对照组和GnRHa组细胞中分别加入不同浓度的5-FU(0.00005mg／ml～5mg／ml)或不同浓度的EPI(0.125μg／ml～2μg／ml)。24小时后，用CCK-8法检测细胞活性。分别计算5-FU和EPI对MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞的半数细胞抑制浓度(IC50)。 结论: ①GnRHa不影响5-FU和EPI对乳腺癌细胞株(MCF-7和MDA-MB-231)的抑制作用。 ②GnRHa可能通过下调MDRl mRNA表达水平，减弱MCF-7细胞的耐药性。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：中英文对照

声明

前言

第一章GnRHa对乳腺癌细胞株生长的影响

1.1实验材料

1.2实验方法

1.3结果

1.4讨论

1.5小结

第二章两种雌激素状态下GnRHa对乳腺癌细胞株生长及ERa、PCNA、GnRH-R mRNA表达的影响

2.1实验材料

2.2实验方法

2.3结果

2.4讨论

2.5小结

第三章GnRHa对乳腺癌细胞株化疗敏感性的影响

3.1实验材料

3.2实验方法

3.3结果

3.4讨论

3.5 小结

结语

参考文献

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致谢